PCR (Polymerase Chain Reaction)

소개글

PCR (Polymerase Chain Reaction)

목차

1. 실험목적
2. 핵산(Nucleic acid)의 화학적 구조
3. 핵산의 구성성분
4. 핵산 (Nucleic acid) 의 종류 및 구조
4. PCR(Polymerase chain reaction) 이란?
5. PCR 구성 요소
6. PCR원리
7. PCR 효율에 미치는 영향
8. Primer 설계상 주의 할 점
9. PCR의 응용
10. 시약
11. 실험 방법
12. PCR에서 주의할점

본문내용

PCR (Polymerase Chain Reaction)
1. 실험목적
중합효소연쇄반응의 원리와 과정을 알고,
이를 알기 위해 핵산(DNA,RNA)의 구조와 핵산의
유전형질을 전달하는 분자로 작용하는 원리,
Primer및 핵산중합효소의 역할에 대해 이해하자.

2. 핵산(Nucleic acid)의 화학적 구조
핵산(nucleic acid) : DNA(deoxyribonucleic acid)
RNA(ribonucleic acid)
DNA에 존재하는 5탄당은 2` 탄소 위치에 hydroxyl기가 없는 데옥시리보오스(deoxyribose)
RNA에 존재하는 5탄당은 2` 위치에 hydroxyl기가 있는 리보오스(ribose)
핵산(nucleic acid)은 뉴클레오티드(nucleotide)의 중합체인 폴리뉴클레오티드(polynucleotide)이며, 각각의 뉴클레오티드 (nucleotide) 는 인산, 염기, 그리고 5탄당으로 구성되어 있다.
뉴클레오시드(nucleoside) : 염기는 5탄당의 1` 위치에 N-glycosidic bond로 연결되어 있는데, 이 염기와 5탄당의 결합체를 뉴클레오시드라 한다.

<중 략>

③ Ice 위에서 조성표에 따라 buffer 용액을 만들고, PCR tube에 각각의 sample을 오염되지 않도록 잘 넣어준다.
※ DNA sample의 경우에는 PCR tube에 각각 오염되지 않도록 조심스럽게 넣고,Taqpolymerase는 Enzyme이므로 냉장고에 보관하였다가 다른 용액을 다 섞고 난 후에 냉장고에서 꺼내어 넣어주고, 다시 한번 잘 섞어준 후 사용한다.

④ 뚜껑을 닫고, 두 세번 흔들어 준 후, PCR을 할 준비를 한다.
⑤ PCR을 켜고, setting한다.
(예) ⇒ 94℃ : 5분
Step 1 : 94℃(40초) Primer, dNTPs, DNA polymerase가 들어간 반응액중에 목적으로 하는 두 가닥의 DNA를 열 변성 한다.
Step 2 : 55℃(40초) [Annealing Temperature] 열변성에 의해 생긴 한 가닥 Template DNA에 Primer를 annealing한다.
Step 3 : 72℃(1분 40초) [Elongase Temperature] DNA polymerase에 의해 상보적으로 DNA가 합성된다. 증폭 산물로써의 두 가닥 DNA를 재 열 변성하여 한 가닥 DNA를 형성한다.

참고 자료

없음