Western Blotting
- 최초 등록일
- 2012.11.17
- 최종 저작일
- 2009.06
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소개글
western blotting
목차
1. 서론
1.1 실험목적
1.2 이론적 배경
1.2.1 Western Blotting 이란?
1.2.2 western blotting 의 3단계
1.2.3 효소의 항체 결합 방법
2. 실험방법 및 기구
2.1 실험기구 및 시약
2.2 실험방법
2.2.1 Electrophoresis and blotting
2.2.2 Blocking the membrane
2.2.3 Primary antibody incubation
2.2.4 Secondary antibody incubation
2.2.5 Detection
3. 결과
3.1 SDS-PAGE
3.2 Western blotting
4. 토의
5. 참고자료
본문내용
1. 서론
1.1 실험 목적
전기영동 한 여러 단백질 중 Western blotting의 항원항체 반응을 통하여 특정 단백질을 찾는 방법에 대해 실험한다.
1.2 이론적 배경
1.2.1 Western Blotting
전기영동 기술은 생체 용액에 있는 개개의 단백질 성분을 분리하는데 기본적인 기술이었다. 종이나 전분(starch), agarose등이 단단하고, 반응성이 없으며, 대류성이 없어서 전기 영동 기술에 많이 이용되었으나 현재는 polyacrylamide가 전기영동의 대부분에 이용되고 있다. 그러나 이 재료의 우수성만으로는 특정 단백질의 검출에는 이용할 수 없다. 1979년 Towbin은 전기영동 시킨 polyacrylamide gel로부터 무수한 구멍이 있는 nitrocellulose membrane으로 단백질을 이동시켜 단백질의 항체 검출하는 방법을 고안하였다.
<중 략>
2.2.3 Primary antibody incubation
1. TBS-T에 primary antibody를 희석한다. (1/1000)
2. 희석된 primary antibody를 1시간동안 상온에서 orbital shaker 위에 두고 반응시킨다.
3. incubation이 끝난 뒤, 2번 wash buffer로 행구어 준 뒤, washing buffer에 15분간 상온에서 washing, 이후 5분간 3번 washing. (washing 과정동안 secondary antibody 준비)
2.2.4 Secondary antibody incubation
1. TBS-T에 Secondary antibody를 희석한다. (1/10000)
2. 희석한 Secondary antibody를 1시간동안 상온에서 orbital shaker에 반응시킨다.
3. 2번 washing buffer로 반응이 끝난 membrane을 행구어 준 뒤, washing buffer에 15분간 1번, 5분간 3번 상온조건에서 washing 한다.( washing 하는 동안 detection solution을 준비한다,)
참고 자료
http://wwwold.ajou.ac.kr/~biotech/study/western/western%20blot.htm
http://blog.naver.com/glena0204?Redirect=Log&logNo=60027227500