PCR (DNA증폭)

소개글

PCR 원리, PCR 이용분야, PCR 개념, 실험방법 기록

목차

1. 원리

2. 실험 재료 및 방법

본문내용

PCR은 1973년 Stanley Cohen와 Herbert Boyer가 제한효소(restriction enzyme)와 리가제(ligase)를 발견하여 DNA를 자르고 붙이는 효소를 발견과 1983년 Kary Mullis에 의하여 중합효소연쇄반응(Polymerase chain reaction) 기술인 PCR의 발명은 생명공학 분야의 혁명적인 업적이다. 현대 생명공학에서 PCR 기법이 적용되지 않은 실험은 거의 없다고 보아도 과언은 아니다.
PCR(Polymerase chain reaction)은 시험관 내에서 반응혼합물을 연속적으로 고온반응(thermal cycling reaction)시켜 DNA를 증폭(amplication) 시키는 방법이다. 기질인 DNA를 고온에서 변성시켜 단일가닥의 주형 DNA로 만들어 짧은 올리고뉴클레오티드 프라이머(oligonucleotide primer)와 상보적인(complementary) 결합을 시키고 DNA polymerase와 dNTP(deoxynucleoside triphosphate)에 의하여 목적 DNA를 합성시키는 것으로 PCR을 설명할 수 있다.
DNA의 양쪽 가닥을 Template로 하여 원하는 DNA를 증폭시키는 방법으로 Genomic DNA로부터 원하는 DNA 부분을 선택적으로 증폭시켜 Agarose gel 또는 Polyacrylamide gel을 이용하여 Band를 확인하게 된다.
(1) DNA denaturation (2) Annealing (Primer의 결합) (3) Extension (DNA 합성)과 같은 세 단계의 과정이 필요하다. Double strand로 되어 있는 Template를 고온(95도)에서 Denaturation시키고, 변성된 Single stranded DNA에 Primer를 낮은 온도(50-65도)에서 결합 시킨 뒤(Annealing), 72-75도에서 Polymerase가 Primer로부터 DNA를 합성하는 세가지 단계를 반복적으로 기계를 이용하여 시행함으로써 증폭된 DNA를 얻게 된다. 이 때 사용되는 Polymerase는 고온에서 번식하는 Taq (Thermus aquaticus)와 같은 세균의 DNA polymerase를 이용한다.

참고 자료

없음