[생물학 실험보고서] DNA elution

소개글

double-strand DNA 분석에서 널리 사용되고 있는 agarose gel 상에서 분리된 DNA로부터 DNA 절편을 회수하는 방법을 이해하고, cloning에 사용할 insert를 준비하는 실험입니다.

목차

Abstract

Introduction

Materials and Methods

Data and result

Discussion

References

본문내용

이번 실험은 double-strand DNA 분석에서 널리 사용되고 있는 agarose gel 상에서 분리된 DNA로부터 DNA 절편을 회수하는 방법을 이해하고, cloning에 사용할 insert를 준비하는 것이다. DNA는 전기영동을 통하여 agarose gel 상에서 주로 크기에 따라 분리가 되는데 이러한 성질을 이용하여 원하는 크기의 DNA를 순수하게 분리하는 것이 가능한 것이다. 본 실험에서는 이전 실험 (실험 6. Polymerase chain reaction)에서 얻은 산물을 전기영동을 하여 원하는 크기의 DNA를 확인하고 코스모진텍 社의 LaboPassTM Gel Extraction kit를 이용하여 절편을 정제하였다. 다음으로 분리한 절편을 BamHⅠ과 XbaⅠ으로 잘라 ligation을 위한 insert 를 만들었고, 다시 한번 전기영동과 elution을 통해 크기를 확인하고, 회수하였다. 실험결과, 650 bp 의 band가 나타났으며, DNA 농도는 약 1 ng/μl 이 나왔다. 이것은 다음 실험인 ligation에는 조금 부족한 양임을 알 수 있고, ligation 확률도 떨어질 수 있음을 예상할 수 있다.


Introduction
PCR 산물의 전기영동은 agarose gel에서 시행한다. 때에 따라서 polyacrylamide gel을 쓸 수도 있는데 이것은 agarose gel보다 더 세밀하게 크기를 분리할 수 있는 장점이 있다. 전기영동(electrophoresis)은 시료를 gel에 loading 후 전기를 걸어서 각 시료의 크기에 따라 다르게 움직이는 성질의 차이로 분리하는 것이다. 전기영동을 할 때 gel이 잠기는 buffer solutio에는 여러 가지가 있으나 주로 TAE와 TBE가 많이 쓴다. TAE는 주로 agarose electrophorsi에, TBE 는 DNA sequencing에 사용한다. 또한 DNA를 gel에 loading하기 위해서는 loading buffer가 필요한데 이

참고 자료

Sambrook J. and D. W. Russell, Molecular Cloning: A laboratory manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York, U.S.A, pp5.18~5.22, 5.29~5.35
연세대학교 의과대학 생화학-분자생물학교실 http://biochemistry.yonsei.ac.kr/
생물학 연구정보센터 http://bric.postech.ac.kr/