PCR, 제한효소 생화학 실험 보고서

소개글

생화학 실험 중 기본적인 PCR 실험과 제한효소 처리 실험에 관한 보고서 입니다.

목차

Objective

Introduction

Materials and Method

Result

Discussion

References

본문내용

Objective
Pre-mix 된 PCR reagent kit을 이용한 특정 DNA 산물의 증폭

Introduction
PCR(polymerase chain reaction)법은 DNA 또는 RNA의 특정영역을 시험관 내에 대량으로 증폭하는 획기적인 기술이다. 그 원리는 극히 단순하고, 쉽게 응용할 수 있기 때문에 많은 분야에 활용되고 있다. PCR 증폭효율에 영향을 미치는 요인으로는 ① 각 단계의 반응온도와 시간, ② cycle수, ③ 반응액 조성(주형 DNA, dNTP농도, Mg2+농도 등), ④ primer 설계, ⑤ 사용 DNA polymerase 등이 있다.

Materials and Method
① PCR 반응 reagent 준비: pre-mix (7ul)+Forward primer(1ul)+Reverse primer(1ul)+plasmid DNA 주형 (1ug/ul)
② PCR machine (BIO-RAD) 을 이용한 PCR 반응 수행
94°C 1min ▶ (94°C 30sec ▶ 60°C 30sec ▶ 72°C 2min) 28 cycles ▶ 72°C 5min
③ 전기영동 (loading dye 사용) 15min
④ UV detection을 이용한 band 확인

참고 자료

References
Innis, M. A., Gelfand, D. H., Sninsky, J. J., White, T. J. (1990). ‘PCR protocols: a guide to methods and applications. `. ISBN 0-12-372180-6
Lubert Stryer (2007), Biochemistry, 6th edition
http://escience.ws/b572/L5/L5.htm
http://addgene.org/vector-database/2297/