RNA 분리 및 농도측정과 전기영동 레포트

소개글

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목차

1. 주제
2. 재료 및 기구
3. 실험 목적 및 원리
4. 실험 방법
5. 실험 결과
5. 이 론
6. 고 찰
7. 참고문헌

본문내용

200ul chloroform을 넣고 15초 동안 invert mixing하고 5분간 ice에서 incubation 한 후 12000~13000rpm 으로 15분간 원심분리한다.
Centrifuge 하는 동안 새 e.p tube에 labeling을 한다.
Trizol ? protein ? water(RNA) 층으로 3단 분리 되면 water층만 따서 e.p tube에 옮긴다.
(ex. 약 600ul ? e.p tube가 흔들리지 않게 주의)
3에서 취한 상등액의 부피만큼 동량의 isopropanol을 넣어준다.
(Water층과 isopropanol이 1:1 volume이 되도록 함)
Invert mixing 해주고 30분 동안 ice incubation 하거나 실온에서 15분간 incubation한다.
12000~13000rpm에서 15분간 원심 분리한다.
Pellet을 건드리지 않고 상층액을 버린다.
DEPC(diethyl pyrocarbonate)로 희석된 70% ethanol 1ml를 넣고 7500rpm에서 7분간 원심 분리한다. -washing
(증류수에는 RNase가 존재 할 수 있으므로 DEPC를 사용함)
70%의 Ethanol을 버리고 1번 더 2분 정도 Centrifuge를 하여 남은 Ethanol을 제거한다.
DEPC 20ul을 넣어 -70°C에서 보관한다.
RNA 농도 측정 (UV-vis spectrophotometer 이용)
Cuvette에 DEPC 50ul를 넣어 흡광도를 측정한다. ( volume 50ul) - Blank
Cuvette에 분리 된 RNA sample 5ul과 DEPC 45ul를 넣고 흡광도를 측정한다. ( total volume 50ul) ? sample (10배 희석)
RNA electrophoresis
<1% agarose gel 30ml 제조>
삼각플라스크에 agarose 0.3g과 1X TAE 용액 30ml를 넣고 microwave oven을 이용하여 알갱이가 없도록 완전히 용해시킨다.
(랩을 씌우고 구멍을 뚫은 채로 녹인다)
용액을 50-60℃ 정도로 충분히 식힌 후 comb를 꽂은 gel plate에 부어준다.
(거품이 생겼다면 plate의 아래로 모아 제거한다)
Gel이 굳도록 20-30분간 기다린 후 gel이 굳으면 comb를 조심스럽게 뽑는다.
Gel을 전기영동 tank에 (-)charge에서 (+)charge로 loading 할 수 있도록 넣고 1X TAE buffer를 채워준다.

참고 자료

한국생화학회, 실험 생화학, 탐구당, 1997.
한국식품영양과학회, 식품영양실험핸드북, 효일 도서 출판사, 2000.
김현숙 외, 최신 영양생화학 실험, 교문사, 2005.
김정국 외, 유전자 클로닝과 RNA 분석 입문서, 월드사이언스, 2006.
한국유전학회 실험서 집필위원회, 유전학실험서, 라이프사이언스, 2004.