plasmid DNA 분리 및 DNA 농도 측정, 전기영동 레포트

소개글

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목차

1. 주제
2. 재료 및 기구
3. 실험 목적 및 원리
4. 실험 방법
5. 실험 결과
5. 이 론
6. 고 찰
7. 참고문헌

본문내용

형질전환 된 E.coli의 cell로부터 plasmid DNA를 분리하고, 분광광도계를 이용하여 DNA의 농도와 순도를 분석한다. 또 agarose gel 상에서 electrophoresis 하여 목적하는 DNA의 크기를 분석할 수 있다.
원리
Plasmid DNA 분리 (이온 교환 크로마토 그래피)
형질전환 된 E.Coli cell로부터 plasmid DNA를 재분리 하고자 하는 실험으로서, plasmid preparation method에는 alkali lysis법, boiling법, 효소 분해법 등이 있다.
형질 전환 균주가 갖고 있는 플라스미드에 존재하는 내성유전자에 상응하는 항생물질이 들어간 선택배지에서 균주를 배양하면, 플라즈미드를 갖고 있는 형질전환 균주는 항생물질이 존재하는 배지에서 살아남는다. 이 형질전환 균주를 액체 배지상에서 적당한 세포수로 배양한 후 회수해 플라스 미드를 얻는다. 세포를 끓이거나, 알칼리 상태에 둘 경우 세포가 용해되면서 세포 내에 존재하는 플라스미드가 세포 밖 수용액상에 나오게 된다. 이것을 원심분리를 통해 세포 잔여물을 제거하면 플라스미드가 다량 녹아 있는 수용액을 얻을 수 있다. 이 수용액에 에틸알코올이나 이소프로필 알코올을 처리하면 DNA가 침전되며 침전된 DNA를 적당한 완충용액에 녹임으로써 플라스미드 DNA를 정제할 수 있다.
혹은 이온 교환 크로마토 그래피 법을 이용하여 보다 순수한 plasmid DNA를 정제할 수도 있다.
DNA 농도 측정
분광흡광계(spectrophiotometer)를 이용하여 DNA 농도와 순도를 분석할 수 있다.

참고 자료

식품영양실험핸드북, 한국 식품영양 과학회, 효일, 2000.
실험 생화학, 한국생화학회, 탐구당, 1997.
김정국 외, 유전자 클로닝과 DNA 분석 입문서, 월드사이언스, 2006.
한국유전학회 실험서 집필위원회, 유전학실험서, 라이프사이언스, 2004