[분자생물학실험] Yeast DNA Ligation and Transformation

소개글

상당히 방대한 분량의 레포트입니다.
포토샵을 이용해서 전기영동 사진을 분석하여 나타냈으며, 결과 분석에 대한 내용이 상당히 많이 들어 있습니다.
Reference의 논문을 번역하여 고찰을 써서 상당히 특별한 레포트 입니다.

목차

1. Title
2. Introduction
1) Plasmid의 특성
2) Plasmid의 분리
3) Plasmid의 제거
4) Plasmid의 복제
5) Plasmid의 구성
3. Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

지난번 Lab에서 얻을 수 있었던 elution 되어진 solution의 부피를 구할 수 있었다. 그 solution 안에는 PCR product로서 우리가 얻고자 하는 DNA fragment가 많이 존재하고 있다. 이 DNA fragment를 우리는 bacterial cell 내부에서 expression 시키기 위해서는 bacterial vector에 insert 시켜야만 한다. 우리는 이번 실험에서 PCR로 증폭시킨 이들 DNA를 insert material을 이용하여 vector에 insert 시키기 위한 작업을 하게 된다. 그 작업은 몇주에 걸쳐서 restriction enzyme과 ligase를 이용하여 만들어진 vector를 bacteria에 transformation 시킨다. 이로서 우리가 얻고자 하는 DNA를 expression 시킨다. 이를 확인하는 작업에는 IPTG와 X-Gal을 이용하게 된다. 이 실험에 사용되는 bacterial plasmid는 pBluescript와 pSP1 이다. 이들 각각의 vector에 각각의 DNA를 insert 시키게 된다. 그 작업은 각각의 vector와 insert를 같이 넣어주고 restriction enzyme을 이용하여 vector를 넣어줄 수 있는 site를 만들어 주게 된다. 이는 vector의 MCS(multi cloing site)의 restriction site를 restriction 하여 이 자리에 DNA insert 또한 restriction enzyme에 의하여 restriction 되어짐으로 하여 각각의 end 부분이 아귀가 맞도록 해준다. 오늘 실험은 여기 까지이다. 이 실험에 앞서서 plasmid DNA의 component에 대하여 알아보도록 한다.

참고 자료

Alan E, Tomkinson, Nicholas F. T., 1990 location of the active site for enzyme adenylate formation in DNA ligase vol. 88, pp 400-404 biochemistry

Sambrook ; Fritsch ; Maniatis Molecular cloning Ⅰ a laboratory manual (2nd) (1989) Essential features of plasmids 1.3 & 1.4 & 2.4

Sambrook ; Fritsch ; Maniatis Molecular cloning Ⅱ a laboratory manual (2nd) (1989)
Essential features of plasmids 6.3 & 5.4 & 5.5