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Bradford에 의한 단백질의 정량

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2002.11.17
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[1]. 단백질 정량의 개요
단백질을 가수분해하면 peptide bond가 끊어지면서 아미노산이 유리된다. 보통 peptide나 단백질을 6N HCl 용액이 들어있는 시험관에서 공기를 제거하고 밀봉한 후 100°에서 8-24시간 동안 가열하여 가수분해시킨다.
이러한 가열조건에서는 모든 peptide bond가 파괴되고 glutamine과 asparagine의 경우에는 side chain의 amide bond도 파괴되게 된다. 또한 tryptophan과 serine, threonine 등의 아미노산은 파괴되기 때문에 이러한 단백질을 정량하기 위해서는 특별히 주의를 기울여야 한다.
산성 용액에서 파괴되는 아미노산을 분석하기 위해서는 별도로 단백질을 alkaline hydrolysis시킨 후 분석한 후에 보정해야 한다. 즉, 단백질의 양을 정량하기 위해서는 단백질의 본질, 단백질의 시료에 있는 다른 성분들의 본질, 정량분석의 신독도 및 정밀도 등에 따라서 적당한 방법을 선택하여야 한다.

[2]. Bradford Assay
Bradford assay는 dye인 Coomassie blue G250이 protein에 binding한다는 사실에 기초한다.

참고 자료

http://club.byulnow.com/app/webclub/fpermit/club_menu.cgi?idx=bio#null
실험생화학. 한국생화학회. 탐구당. 1986. pp.230-231, 255-257

태그

#Bradford assay#단백질 정량#단백질#정량

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