(세포생물학) 제한효소 이용한 gDNA, plasmid 절단

소개글

세포생물학 실험레포트 입니다.

목차

Ⅰ. Introduction
Ⅱ. Materials
Ⅲ. Method
Ⅳ. Result
V. Discussion

본문내용

Ⅰ. Introduction
1) 제한효소 (restriction enzyme)

‧ 제한효소는 세균바이러스의 증식을 막아주는 효소로 침입한 바이러스의 DNA를 절단하는 효소로 발견되어 바이러스의 증식을 제한 (restriction)한다하여 이름 붙혀 졌다.
: 숙주 세포의 핵산분해효소 (제한효소)가 바이러스의 특정한 염기배열을 인식하여 그 부위를 절단하여 바이러스의 지놈을 파괴
‧ 제한효소는 특정한 염기배열을 인식하여 그 염기배열만을 절단
: 대략 4-8개의 염기배열을 인식하여 절단하는 제한효소가 유용
: 제한 효소는 자신이 인식하는 염기배열을 절단할 때 그림과 같이 돌출된 부분은 만들 수 있으며, 이들 돌출된 부분은 서로 상보적이기 때문에 다시 서로 수소결합을 통하여 결합하게되며, 유전자 분리 (클로닝)에까지 이용

2) 제한효소를 이용한 유전자의 지도 작성

‧ 제한효소 지도란 특정한 DNA에서 특정한 제한효소가 상대적으로 어느 위치에 존재하는 지를 표시하는 방법
: 제한효소는 특정한 염기배열을 인식하여 DNA를 절단하기 때문에 여러 제한효소의 위치가 서로 같은 DNA는 서로 같은 DNA일 가능성이 매우 높다.
: agarose를 이용한 DNA 조각의 확인
: 몇 가지 제한효소로 DNA를 절단하여 잘려진 DNA 조각의 크기를 측정

와 연결효소 그리고 플라스미드를 이용한 유전자의 분리 (cloning)

‧ 제한효소를 이용하여 사람의 DNA를 절단 한 후, 이들 조작을 대장균에서 증식하는 플라스미드 DNA에 연결한 후, 대장균에 넣어준다 (형질전환)

‧ 형질전환된 대장균에서 분리하고자 하는 유전자를 가진 대장균 클론을 확인한다
: nucleic acid hybridization
: protein expression assay
: antibody reaction

참고 자료

심웅섭외 6인/분자생물학/월드사이언스/1999/p.386-387
카이지에이지/신분자유전학/신일상사/2001/p.215-217
강종백외 4인/유전자크로닝입문/탐구탕/2004/p.60-72
watson외 4인/유전자의 분자생물학/탐구탕/1991/p. 358-361