Genomic DNA isolation

소개글

Theme
Genomic DNA isolation

Abstract
어떤 생물체 전체의 DNA를 Genomic DNA라고 하는데 Genomic DNA를 따로 분리하기 위하여 실험을 하였다. 처음에 lysozyme을 이용하여 세포벽을 파괴하는 과정을 거친 후 TEN buffer를 이용하여 세포벽의 전체 구조를 약화시키는 과정 그리고 SDS를 사용하여 세포막의 용해를 촉진하며 proteinase K로 DNase를 불활성화시킨 뒤 단백질 등 각종 유기물을 phenol과 chlorofoem과 같은 유기용매를 사용하여 제거하는 과정 그리고 마지막으로 ethanol을 이용하여 DNA를 침전시키고 RNase를 이용하여 RNA를 제거하는 과정을 거처서 DNA를 분리하였다.

목차

Theme(제목)

Abstract(요약)

Materials & Methods (도구 & 방법)

Principle(원리)

Results(결과)

Discussion(고찰)

References(참고문헌)

본문내용

유기용매를 사용하여 제거하는 과정 그리고 마지막으로 ethanol을 이용하여 DNA를 침전시키고 RNase를 이용하여 RNA를 제거하는 과정을 거처서 DNA를 분리하였다.
Methods
TEN buffer, Mini-centrifuge, centrifuge, 1.5ml tube, Lysozyme, Proteinase-K, phenol, chloroform, Micropipette, 3M sodium acetate, 100% EtOH, 70% EtOH, speed-vac, D. W, agarose gel, 바실러스균, RNase,
바실러스 균을 하루 동안 배양한 후 원심분리기에 넣어 셀을 다운 시킨 후 상등액을 제거하여 cell harvesting하였다. TEN buffer 200μ액을 제거하였고 다시 TEN buffer 400μl를 넣고 vortex해서 pellet을 풀어준 후 Lysozyme(10μg/ml) 5μl를 넣고 37℃에서 30분간 반응시켰다. Proteinase-K(20μg/ml) 1μl와 RNase 1μl 첨가 후 37℃에서 30분간 반응시킨 후 10% SDS 10μl 첨가 후 inverting 후 37℃에서 또 30분간 반응시켰다. 동량의 phenol(400μl) 첨가 후 12000rpm, 4℃에서 10분간 원심분리 한 후 상등액 (400μl)를 추출하여 다시 동량의 phenol : chloroform(400μl) 첨가 후 12000rpm, 4℃에서 10분간 원심분리 하였다. 상등액(50μl)을 채취 한 후 3M sodum acetate를 상등액의 10%(5μl)가 되도록 첨가 후 inverting 하였다. 그리고 상등액의 2~3배(100μl) volume의 100% EtOH 첨가 후 -70℃에서 30분간 반응 후 15000rpm, 0℃에서 10분간 원심분리 하였다. 상등액을 완전히 버리고 70% EtOH를 100% EtOH의 1/2 volum(50μl)이 되도록 첨가 후 inverting하고 상온에서 3분간 방치 하고 13000rpm, 0℃에서 30분간 원심분리하고 상등액을 버리고 건조 하였다. 20μl의 DW를 첨가하여 DNA를 풀어 준 후 loading dye와 섞어 준 후 전기영동 하였다.

참고 자료

유민•김병오•이혜영 저자/ 2007년/ 보문각/ 미생물학실험서-유전체 DNA 분리/ p79~88
Takeshi Uozumi / 2001년 / 청문각 / 유전공학개론 제4장- 3. DNA의 Gel 전기영동 / p41~42