단백질 정량

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단백질정량

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실험이론

. 단백질
- 단백질은 세포의 성분 중에서 물 다음으로 많은 양을 차지하는 것으로 탄소, 수소, 산소, 질소로 구성되며, 황을 함유하는 것도 있다.
단백질은 생물의 세포막 등 세포기관을 구성하는 중요한 성분으로 몸을 구성하는데 쓰이며, 효소, 호르몬등의 성분으로 생체내에서 일어나는 각종 화학 반응과 생리기능을 조절하기도 한다. 또 근육, 헤모글로빈 및 항체를 구성하는 성분이기도 하다.
단백질의 기본 구성단위 : 아미노산

단백질 종류
() 단순단백질(simple protein)
= α-아미노산만으로 이루어진 단백질이다. 가용성 단백질과 불용성 단백질로 크게 구별된다. 또 가용성 단백질은 각종 용매에 대한 용해성의 차이에 따라 알부민 글로불린 프롤라민 글루텔린 염기성 단백질로 세분된다.
(2) 복합단백질(conjugated protein)
= 단백질의 분류 상 이름으로 아미노산만으로 된 단순단백질에 다른 유기 화합물 또는 원자단이 결합된 단백질이다. 결합된 분자 또는 원자단을 보결분자단이라 한다. 이 보결분자족의 종류에 따라 핵단백질, 색소단백질, 리포 단백질 등이 있으며 생리적으로 중요한 것이 많다. 조효소를 함유한 효소 단백질도 복합단백질의 일종이며 이 경우에는 조효소는 효소 활성의 출현에 필요할 뿐만 아니라 단백질 분자를 안정화 시키고 있는 예도 많다.

<중 략>

5. Bradford
. 표준측정 방법
① 0~00㎍의 단백질 용액 00uℓ을 시험관에 취한다.
( 단백질의 농도를 모를 경우 원액, 0, 00 또는 00배 희석액을 취한다.)
② 검량곡선을 얻기 위하여 0, 20, 40, 60, 80 및 00uℓ의 단백질 용액(㎎/㎖ BS 또는 γ-globulin)을 시험관에 각각 취하고 증류수를 가하여 00uℓ이 되게 한다. 공시험으로 시료 대신에 증류수를 00㎕을 취한다.
③ 증류수 4㎖를 시험관에 가하고 염색시약 ㎖을 시험관에 가하고, 거품이 생기지 않게 흔들어 섞는다.
④ 염색시약을 넣고 5~30분 사이에 595㎚에서 흡광도를 측정하여 표준 검량곡선과 비교하여 단백질량을 계산한다.

2.미량측정방법
-이 방법은 표준법 보다 감도가 높고 사용되는 단백질 양이 적기 때문에 시료를 아끼기 위해 많이 이용한다.
①-0uℓ를 회용 큐벳에 취하고 증류수를 가하여 00uℓ가 되게한다. 단백질의 농도를 모를 경우에는 원액 0배 또는 00배를 희석액을 취한다.
②검량곡선을 얻기 위하여 0, 20, 40, 60, 80, 00uℓ의 단백질 용액을 시험관에 각각 취하고 증류수를 가하여 00uℓ가 되게 한다. 공시험으로 시료 대신에 증류수 00uℓ를 취한다.
③증류수 700uℓ를 시험관에 가하고 섞은 후 염색지시약을 200uℓ를 시험관에 가하고 거품이 생기지 않게 흔들어 섞는다.
④염색시약을 넣고 5~30분 사이에 595nm에서 흡광도를 측정 하여 표준 정량곡선과 비교하여 단백질량을 계산한다.

참고 자료

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