Edman 분해법

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Edman 분해법
Edman 분해법는 단백질의 1차 구조를 분석하는 목적으로 광범위하게 쓰이는 방법이다.
PTC(phenylisothiocyanate)법이라고도 하며 그 반응을 아래의 그림에 나타내었다. Phenylisothiocyanate(PTC)를 pH 8∼9, 실온에서 peptide와 반응시키면 N-말단이 thiocarbamyl화 된 PTC-peptide가 얻어진다. 이것을 산성조건하, 예를 들어 trifluoroacetate(CF3COOH)와 반응시키면 N-말단 아미노산만 thiazoline 유도체로서 유리하고 나머지의 단백질부분은 분해하지 않고 남는다. Thiazoline 유도체는 이어서 환상구조를 만들어 PTH(phenylthiohydantoin)가 된다. PTH 아미노산은 ethylacetate로 추출하여 각종 크로마토그래피로 동정할 수 있다. 미분해로 남은 peptide 또는 단백질은 계속해서 다음의 N-말단 동정에 사용할 수 있다. 최근에는 이 일련의 반응을 자동화한 장치(peptide sequencer)도 시판되고 있으며 조건이 맞으면 N-말단으로부터 60 아미노산잔기 정도는 단기간에 배열을 결정할 수 있다.
- 이탈된 PTH로부터 N-말단 아미노산의 구조를 알 수 있다.
- 짧아진 peptide 사슬은 두번째 Edman 분해가 가능하다.
- 연속적으로 N-말단 아미노산을 절단하면서 분석한다.
- peptide 사슬을 구성하는 아미노산의 연결 순서를 알 수 있다.
- Edman 분해법의 주요 시약은 Phenylisothiocyanate이다.
Limitations of Edman degradation method
최대 30주기가 가능하지만 일반적으로 practice에서 15~20주기까지만 가능하다

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