Restriction enzyme digestion-Ligation

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Restriction enzyme digestion
Ligation

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Method
-Restriction enzyme digestion
-Ligation
Principle
-Restriction enzyme digestion
-Ligation

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미생물학 실험 레포트 양식
Theme(제목)
Restriction enzyme digestion
Ligation
이름)
2010년 06월 01일 3조
Abstract(요약)
유전자 재조합 실험을 하기 위한 유전자 DNA의 제한효소 절단 실험을 하였다. 처음에 gaIK을 섞은 후 Enzyme를 넣고 Incubation을 한 후 phenol/chloroform extraction 처리를 해주고 chloroform extraction을 해준 후 ethanol precipitation 처리를 하고 전조 시킨 뒤 증류수에 녹여서 전기영동을 한 후 Ligation를 하였다.
Method(실험방법)
Restriction enzyme digestion
두 개의 1.5 ml tube를 준비한 후 각각의 tube에 다음과 같이 넣었다. A-tube : Digestion of the PCR fragment (total 30 μl)
Water(3차증류수) 5 μl
galK PCR product 20 μl
Buffer(10x) 3 μl
Hind III 1 μl
Sac I 1 μl
B-tube : Digestion of the plasmid vector (total 30 μl)
Water(3차증류수) 5 μl
β - DNA 20 μl
Buffer(10x) 3 μl
Hind IIII 1 μl
Sac I 1 μl
손가락으로 tube 아래를 여러 번 쳐서 내용물을 잘 섞었고 5초 미만 동안 원심 분리하여 내용물을 tube의 아래에 모았다. 그리고 37℃에서 3시간 동안 넣어두는데 이때 제한효소가 DNA를 절단한다.
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참고 자료

Restriction Enzyme Digestion |작성자 chj_2731
References(참고문헌)
미생물 실험 13과 유전자 재조합 실험 페이지 104~110