Western Blotting에 대한 프로토콜

소개글

Western Blotting에 대한 실험 프로토콜입니다.

목차

Reagents
Protein Transfer
Antibody Reaction
Detection (ECL법)
기타 검출법

본문내용

1. PVDF membrane을 gel 크기에 맞게 자른 후 100% methanol에 1-5분간 담가둔다.

*Mini-gel 전기영동 장치를 사용하는 경우 membrane을 6x8cm로 미리 잘라 놓고 보관하는 것이 편리하다.
*Methanol을 처리하는 것을 membrane activation이라 하며 gel내의 단백질이 membrane과 hydrophobic interaction을 할 수 있게 만들어 주는 과정이다. Nictrocellulose를 사용할 경우에는 이과정이 필요없다.

2. Methanol 처리를 한 membrane을 1x transfer buffer로 옮겨준 후 10분간 방치한다.

* 이후 membrane에서 절대 물기를 말려서는 안 된다.

3. Trasfer할 gel을 1x transfer buffer로 살짝 적셔주고 membrane위에 기포가 생기지 않도록 주의하며 올려 놓는다.

참고 자료

없음