단백질정량

*윤*

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최초 등록일: 2011.05.17
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생화학실험 예비레포트입니다.

본문내용

단백질 정량
Sample 내에 포함된 단백질의 양 또는 농도를 구하는 과정
정확성과 간편성이 중요하게 여겨져 실험에 따라 여러 다양한 단백질 정량방법사용
colorimetric법(비색법)
electrophoresis법(전기영동법)
*
Lowry
Lowry assay
Biuret 법을 발전시킨 방법
Biuret 반응의 원리 이용
-알칼리성에서 단백질의 peptide 결합과 구리가 반응하여 Cu+이온을 생성
알카리성 조건
▷Cu2+와 단백질용액을 반응시킨 다음 Folin시약을 첨가 →Cu+에 의하여 phosphate molybdenum acid-tungsten acid complex가 환원되어 파랗게 발색
*
Lowry assay
푸른색- 강도는 tryptophan과 tyrosine양에 영향
계면 활성제, EDTA등의 chelate제, DDT와
2-mercaptoethanol 등의 환원제등 많은 물질에 의해 방해
0.2~2 mg/ml
측정 파장 : 770 nm
*
Lowry assay
1) Lowry시약 A와 B의 비율을 50:1로 혼합
2) 0~100mg/ml의 standard BSA sample과 정량을 해야 하는 sample을 준비
3) Sample과 lowly시약 혼합액을 1:10비율로 가함
4) 37°C에 30분간 방치
5) 770nm에서 측정
*
Lowry assay
장점
▷0.01mg/mL정도의 양까지 감지할 수 있을 정도로 민감하고 단
백질이 침전되어 있더라도 측정할 수 있고 측정범위는 0.01-
1.0mg/mL임.
단점
▷Biuret method에 기초를 두고 있기 때문에 단백질의 종류에 따
라 그 값이 변할 수 있고 Folin-Ciocalteu반응을 방해하는 물질
들이 많기 때문에 단백질 용액에 그러한 물질이 있는 경우, 제거를 하거나 보정을 해주어야 함.

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