Protein purification(단백질 정제)

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번대기를 이용한 단백질정제 및 분석하는 실험에 관련된 발표자료

본문내용

실험 목적 및 sample선정
우리가 일상생활에서 흔히 접할 수 있는 물질에서 속한 단백질을 Column Chromatography를 통해 특정 단백질의 농도를 측정하고 전기영동을 통해 단백질을 분리 한다.
시중에 흔히 구할 수 있고 가격이 싼 동물성 단백질인 번데기를 이번 실험의 Sample로 채택
실험에 사용 된 주요 장비
Clean bench
Homogenizer
Centrifuge
Shaking incubator
Double beam Spectro photometer
Stirrer
Aspirator
Balance
PH meter
Gel dryer
Extraction : crude protein
Extract solution
-250mM stock solution을 이용해 25mM EDTA 100ml을 제조.
Homogenizer
-번데기 150g과 EDTA 100ml을 넣고 분쇄.
-메스실린더에 거즈를 이용하여 걸러냄.
총 98ml 중 5ml을 Sample 1로 지정하여 보관.
Salting out
Ammonium sulfate 사용
- 걸러낸 98ml의 번데기와 50ml의 EDTA를 섞은 후
A.S를 한스푼씩 넣으면서 교반기에서 녹임.
- 녹인 후에 1시간 방치한다
Salting out
Centrifugation
- 4℃에서 10분간 원심분리.(10000 RPM)
- 원심분리 후 pallet을 Sample 2-1로 지정.
- 상등액은백질 때문에
5ml 보관. 이를 Sample 2 으로 지정.
제조
Membrane tube 전처리
Dialysis를 하기전 sample 2-1에 Tris-Hcl 10ml를 넣은 시료를 sample 3 으로 지정.
.
.
..

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