Cloning후, Mini-preparation을 이용한 형질전환 유전자 확인

소개글

하나하나 실험해가며 도출된 결과를 바탕으로 작성한 소중한 실험 결과 레포트입니다. 학교에서 우수 보고서로 추천될 만큼 잘 쓰여졌고, 실험 결과뿐만이 아니라 실험 방법, 실험 원리, 그리고 실험을 이해하기 위한 사전 지식까지도 기재되어 있습니다. 물론 실험 결과와 그에 따른 분석도 기재되어 있으므로 필요한 주제와 일치되시다면 결제 후에 후회하시는 일은 없으실 것입니다. ^^*

목차

Introduction
- 1. Vector
- 2. Selection과 control
- 3. Transformation
- 4. Mini preparation

Material & apparatus

Methods
- 1. PCR Product Cloning(T-vector)
- 2. E. coli Transformation (Competent cell 만들기, Transformation)
- 3. Mini- preparation of plasmid DNA 추출

Results & Discussion
- 1. 형질전환 colony수
- 2. Mini-Preparation 결과

References

본문내용

- 3. Mini- preparation of plasmid DNA 추출

1. O/N시킨 bacteria 1.5ml(3ml)를 eppi-tube에 넣어준다.
2. 30초 동안 centrifugation
3. 120㎕(240) TEG용액(solution 1)을 넣고 vortexing하여 섞어준다.
4. 240㎕(480) NaOH/SDS( 0.2M/1% : solution 2)를 더하고 tube를 거꾸로 바로 반복하여
잘 섞어준다.(gently) NaOH(5M) = 20㎕
10% SDS = 50㎕
d.d H2O = 430㎕
5. 180㎕(360) KOAc(3M : solution 3)를 넣고 tube를 거꾸로 하여 vortexing 한다.(gently)
6. 얼음에 3분 50초간 둔다.
7. centrifugation(10분 /4℃)한 후, 윗 용액을 새로운 tube로 옮긴다.
8. 270㎕(540) propanol(4℃)을 넣고 centrifugation(15분 / 4℃)
9. 얻어진 pellet에 500㎕ EtOH(70%)를 넣고 vortexing하여 씻어준 후,
다시 centrifugation(15분 / 4℃)
10. 얻어진 pellet을 vaccum dry(5분) 한 후 200㎕ TE에 용해 시킨 후, -20℃에서 보관한다.

참고 자료

없음