[생화학] 핵산 추출 실험

소개글

생화학 핵산 추출 실험 결과 및 디스커션입니다.

목차

없음

본문내용

1.title : 핵산추출
2.Date : 2010. 11. 22
3.Name :
4.Reagent & apparatus
trizol, slide glass, microtube, chloroform , Isopropyl alcohol
5.method
1.첫시간에 분리한 간 조직을 이용한다.
2.Trizol 1ml를 넣어 slide glass로 잘게 자른 후 microtube에 담는다.
3.chloroform 200ul를 넣고 20회 정도 강하게 흔들어 준 후 ,실온에 2분간 방치한다.
4.원심분리를 4˚C 12000xg,15분간 수행하고 상등액을 조심히 new tube로 옮긴다.
5.Isopropyl alcohol 500ul를 넣고 부드럽게 5-10번 inversion을 통해 섞어 준다.
6.혼합된 sample을 10분간 실온에서 방치한다.
7.원심분리를 4˚C 12000xg,10분간 수행하고, 상등액을 제거한다
8.70% ethanol 1ml tube에 넣는다.
9.원심분리를 4˚C 7500xg, 5분간 수행하고, 상등액을 조심히 제거한다.
10. 5분간 RNA pellet을 공기 중에 건조시킨다.
11. RNA pellet을 공기중에 건조시킨다.
6.Discussion
1. 핵산 추출 원리
1) RNase로부터 RNA를 보호한다.
: 주위 환경의 RNase contamination 방지하기 위해서 시약에 DEPC라는 RNase inhibitor를 처리를 한다. 용기는 대개 1회용을 쓰고, 어쩔 수 없는 경우 autoclave, baking 등을 이용한다. 또한 장갑을 착용하여야 하며 RNA work 만을 위한 용기를 사용한다.
또한 세포가 파괴되면서 나오는 endogenous RNase를 Guanidine HCl, Guanidinium thiocyanate와 같은 물질로 억제해야 한다. 따라서 RNA 분리를 위해서 세포를 파괴할 때는 반드시 세포가 파괴되자마자 위와 같은 용액에 노출이 될 수 있도록 해준다.

참고 자료

http://kin.naver.com/qna/detail.nhn?d1id=11&dirId=1116&docId=53003105&qb=7ZW17IKwIOygleufiSDrsKnrspU=&enc=utf8§ion=kin&rank=1&search_sort=0&spq=0&pid=gn4%2Buloi5UKssZpiCBssss--223446&sid=TPI7Eqga8kwAAEGgKtI