[생화학]단백질의 정성 및 정량

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단백질의 정성및 정량 실험 과정 결과 및 디스커션입니다.

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1.Title : 단백질의 정성 및 정량
2.Date : 2010. 9. 27
3.Name:
4.Reagent : 간, PBS시약 slide glass, conical tube, microtube
5.Method : 1.세등분의 간중 하나를 이용한다.
2.간을 15ml의 PBS에 넣고 fog homogenize slide glass를 이용해 homogenize한다(A용액:500마이크로 리터 보관)
3.남은 상등액을 conical tube에 옮긴 후 4˚C에서 10분간 1000rpm으로 원심 분리한다(B용액 : 상등액 500마이크로 리터 보관)
4.남은 상등액 중 1ml을 microtube에 담고, 30분간 3000rpm으로 원심분리한 다(C용액 : 상등액 500마이크로 리터 보관)
5.표준물질 (BSA)을 2배씩 희석한다 (농도 : 1, 0.5, 0.25, 0.125, 0.0625mg/ml)
6.미지시료(A,B,C용액)를 50배 희석하여 정량에 사용한다.
7.표준물질과 미지시료, blank를 microtube에 75마이크로 리터씩 넣는다 (blank:PBS)
8.375마이크로 리터 시약 C를 microtube에 넣고 잘 섞은 후 실온에서 10-15분간 방치한다.
9.Folin-Ciocalteau 시약을 50마이크로 리터 가하고 즉시 교반한다.
10.잘 섞은 시료를 96-well microplate에 200마이크로리터씩 분주한다.
11.실온에서 30분 방치한다.
12.O.D750nm에서 흡광도 측정한다.
13.측정한 흡광도로 검량선을 작성한다.
14.미지시료의 농도를 구한다.
6.Result
A농도 : 75.558 X 50= 3777.9
B농도 : 696.8 X 50 = 34840
C농도 : 519.285 X 50 = 25964

참고 자료

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