대장균 형질 전환 및 플라스미드의 DNA의 분리

소개글

대장균 형질 전환 및 플라스미드의 DNA의 분리

목차

1. 목 적
2. 재 료
3. 실험 결과
4. 고 찰

본문내용

2. 실험 방법

형질전환 (heat shock)
① 에펜도르프 튜브에 대장균(com. cell) 200㎕과 plasmid(pBmKSK4) 5㎕를 넣고 저온
(Ice)상태에서 30분간 반응시킨다.
② 반응 후 42℃에서 90초간 반응시킨다. - heat shock
③ Ice에서 10분간 놓는다. - 안정화
④ LB 1ml을 넣고 37℃ 인큐베이터에서 30분에서 1시간 정도 배양한다.
⑤ 회복시간 후에 배양된 세균 중 100㎕를 LB(Amp+)배지에 도말한다
⑥ 도말 후 37℃에서 12시간 배양한 후에 4℃에서 보관하여 활성을 떨어뜨린다.
선택균주 접종
① 에펜도르프 튜브 4개에 LB(Amp+)을 1ml 씩 분주한다.
② LB(Amp+)배지에서 selection 된 colony 중에서 뭉치지 않은 단일colony 4개를 고른다.
③ 이쑤시개를 이용하여 해당 콜로니를 찍어 넣어서 접종한다.
④ 37℃ shaking incubator에서 16~18시간 배양한다.
Plasmid 분리

참고 자료

없음