[실험예비] 그람염색

소개글

1. 실험목적
그람염색의 원리를 이해하여 세균을 그람 양성균과 그람 음성균으로 분류됨을 알수 있다. 또한 양성균과 음성균을 분류하는 기준은 세포벽의 구조에 차이에 의해서라는 것도 알게 될 것이다.

목차

1. 실험목적
2. 이 론
3.탈색제
4.대조염색

본문내용

그람 염색 결과 자주색으로 염색되는 세균은 그람양성이며 분홍색으로 염색되는 세균은 그람 음성이다. 양성과 음성은 전기적 성질과는 무관하며 단순히 형태학적 차이를 나타내는 용어이다. 그람양성균과 음성균이 서로 다르게 염색되는 것은 근본적으로 세포벽 구조가 다르기 때문이다. 세균의 세포벽은 크기와 형태를 유지하게 하며 또한 삼투압에 의한 세포 파열을 방지하는 역할을 한다. 세포벽에는 펩티도글리칸(peptidoglycan) 이라고 하는 물질이 있기 때문에 아주 단단하다. 그람양성균의 세포벽은 여러 층의 펩티도글리칸층이 두껍게 감싸고 있는데 세포벽의 약 80-90%가 펩티도글리칸이다.
반면, 그람음성균의 세포벽은 펩티도글리칸층이 한 겹으로 매우 얇으며, 이층 외부에는 인지질, 리포폴리사카라이드, 리포프로테인 등으로 구성된 외막(outer membrane)이 감싸고 있는 형태로 세포벽이 이루어져있다. 세포벽의 10-20%만이 펩티도글리칸이다. 이러한 세포벽 구조의 차이로 인한 그람 염색의 차이는 세균을 분류하는 가장 기본적인 기준이 되었다.
그람 염색은 기본적으로 4단계로 구성되어 있다.
제 1 단계 - 크리스탈 바이올렛 염색
염기성 색소인 크리스탈 바이올렛(crystal violet)으로 염색하면 그람 양성 및 음성균 모두 자주색으로 염색된다.
제 2단계 - 착색 단계(매염)
1단계에서 염색된 세균에 요오드 용액을 처리하면 크리스탈 바이올렛과 요오드가 반응하여 세포내에 불용성의 복합체(크리스탈 바이올렛-요오드 복합체, CV-I)을 형성한다. 따라서 그람 양성 및 음성 세균 모두 자주색으로 여전히 보인다.
제 3단계 - 탈 색
착색된 세균에 탈색제인 알코올 시약을 처리하면 착색된 CV-I 복합물이 용해된다. 이때 그람 양성균과 음성균은 서로 다른 반응을 보인다. 그람양성균인 경우에는 복합물이 세포내에 그대로 남아있지만, 그람 음성균은 탈색된다. 따라서 탈색 단계가 지나면 그람 양성균은 자주색이지만 그람음성균은 백색으로 보인다.
제 4단계 - 대조 염색
분홍색의 염기성 색소인 사프라닌(safranin)으로 대비 염색을 하면 백색으로 탈색되었던 그람 음성균은 사프라닌의 색인 분홍색으로 염색된다.

참고 자료

없음