DNA 바이오마커 분석

소개글

DNA 바이오마커 분석 실험

목차

1. Purpose
2. Principle
3. Apparatus & reagents
4. Procedure
5. Results & Discussion
6. References

본문내용

4. Procedure
◆RNA extraction
1. HepG2에서 RNA만 추출한다.
◆cDNA synthesis
1. PCR tube에 oligo dT와 dNTPs, total RNA를 넣고 물을 10㎕까지 채워준다.
2. 65℃, 5분간 heat 시켜서 RNA와 primer의 이차구조를 없애고 specific binding 할 수 있도록 한다.
3. RT enzyme과 buffer를 넣고 물로 20㎕까지 채워준다.
4. 42℃, 1시간 반응시킨 후 70℃, 15분간 반응을 inactivation 시킨다.
◆DNA polymerization
1. Template DNA 1㎕, PCR Master Mix 10㎕, Primer-Forward 1㎕, Primer-Reverse 1㎕, H2O 7㎕를 PCR tube에 넣고 섞는다.
(Master Mix에는 dNTP, DNA Polymerase, PCR buffer 등이 미리 포함되어 있다.)
2. PCR 기계의 온도를 원하는 대로 setting한다.
Initial denaturation 95℃ 5분
Denaturation 95℃ 30초
Annealing 57℃ 30초
Extension 72℃ 30초.................33 cycle
Final extension 72℃ 7분
3. PCR 반응을 수행한다.

참고 자료

http://blogcafe.dreamwiz.com/cafe/CafeFolderList.asp?cid=pinehill&folder_no=12&list_id=8656657&list_page=4
http://enc.daum.net/dic100/contents.do?query1=b19j0368a