Enzyme kinetics(효소 반응속도론) 결과 report

소개글

Enzyme kinetics(효소 반응속도론) 실험에 대한 결과 report입니다.
Michaelis-Menten식과 Lineweaver Burk plot을 이용하여 실험data를 해석하고
enzyme(효소)의 inhibition type을 추정하게 됩니다.

목차

1. Results
(1) Raw data(time vs absorbance)
1) inhibitor가 있을 때
2) inhibitor가 없을 때
3) Time vs absorbance plot
(2) Time vs 생성물의 농도(conc. of product)
(3) 기질의 농도 vs 초기속도(Vo)
(4) Lineweaver-Burk plot을 이용해서 Km과 Vmax 값 구하기
(5) Inhibition type의 추정

2. Discussion

3. Reference

본문내용

1. Discussion
이번 실험에서는 효소와 기질의 반응속도에 관한 이론(Michaelis-Menten)을 바탕으로, 반응속도를 직접 측정하고 이를 통해서 효소-기질-저해제 간의 결합 및 저해 mechanism을 추정해 볼 수 있었다. Michaelis-Menten 이론의 가장 큰 매력이자 장점은, 효소와 기질의 직접적인 구조의 규명 없이도, 단순하게 반응속도의 기질 의존성만을 측정하여 효소와 기질 그리고 저해제의 결합 해리 mechanism을 쉽고 빠르면서도 심도 있게 이해할 수 있다는 점이다.
실험 방법에서는 inhibitor가 있는 경우와, 없는 경우의 2가지 경우에 대해서 기질의 농도를 변화시켜가면서 반응속도를 측정하였고, 각각에 대해 반응속도의 기질 농도에 대한 의존성을 Michaelis-Menten 곡선과 Lineweaver Burk plot으로 확인하였는데, 값은 inhibitor의 존재 유무에 영향을 받지 않고, 값은 inhibitor가 있는 경우 더 커지게 되는 전형적인 경쟁적 저해 경향을 따르는 모습을 보였다. 따라서 추정하는 inhibition의 mechanism type은 경쟁적 저해로 생각된다. 경쟁적 저해제의 경우 가 변하지 않는 이유는 효소의 결합 site에 대해 기질과 경쟁하기 때문에 충분히 많은 기질이 들어가게 되면(inhibitor대비 기질이 압도적으로 많게 되면) 극복이 가능하기 때문이다. 또 값이 커지는 이유는 앞서 언급한 바와 같이 기질과 효소사이의 affinity의 감소로 설명할 수 있다.
실험 내용으로 들어가서 보면 반응속도 측정 실험을 할 때, enzyme을 test tube에 넣는 순간과 흡광도 측정(생성물 농도 측정)을 시작하는 시간 사이에는 어쩔 수 없이 시간간격이 존재하게 되는데 반응속도가 생각보다 빨라서 시간간격이 일정치 않는 경우 큰 오차를 보인다는 사실을 실험을 통해 알게 되었다. 첫 번째 case인 inhibitor가 없는 경우에 대해 반응속도 측정 실험을 할 때에는 enzyme을 test tube에 넣는 순간과 흡광도 측정 시작을 하는 시간사이의 간격을 측정하지 않고 하였는데

참고 자료

없음