암세포 억제와 관련 있는 SIT1 gene

소개글

작년에 암세포 억제 유전자 관련해서 실험을 2달동안 한것을 모아서 레포트 형식으로 작성한것입니다.. 학교 졸업 할때 졸업 논문으로 쓰라고 했는데.. 논문이라기보다..레포트에 어울릴듯 하네요...SIRT1 유전자에 관련된 실험 보실분은 참고 하시고요..실험 결과는 ppt자료로 따로 올렸어요~ (암세포 억제와 관련 있는 SIT1 gene의 ppt 실험결과 자료)검색하시면 나올거에요..

목차

abstract
Ⅰ Introduction
Ⅱ materials & methods
Ⅲ Results & Discussion
Ⅳ Reference

본문내용

abstract

SIRT1 유전자는 암,노화에 관여 하는 유전자 이다. 이 SIRT1유전자를 조절하는 유전자들에는 gst와 fusion하는 T1유전자와 gfp와 fusion되는 T4유전자가 있는데, 이 두 유전자를 확인 함으로써 SIRT1유전자의 유무를 알수 있기 때문에 이 실험을 하게 되었다.
실험은 PCR로 DNA를 증폭하고, 아가로스젤로 확인한후, 제한효소로 자르고,T1의 경우 PGEX4T를, T4의 경우 PEGFT를 ligation 시켜서 mini preparation하였다.
Mini preparation한 sample중 순차적으로 순서를 붙였는데, 그중 1,2,4번째의 sample에서 가장 잘 관찰 되어서 이것으로 실험을 진행 하였다.
T1-PGEX4T는 Ampicillin을첨가하고, BL21-DE3에 transformation 시킨뒤, small scale로 induction test를 하고, large scale로 induction 한후 colum을 장착해 단백질을 추출 하고, T4-PEGFT는 kanamycin을 첨가하고, 동물세포 H1299에 transfection시킨 다음 westhern-blotting으로 최종 확인 하였다.
Ⅰ Introduction
인간 SIRT1 단백질은 특이적인 기질단백질의 탈아세틸화를 통해 세포의 죽음, 스트레스, 노화등의 다양한 생리학적 반응을 조절한다. DNA 손상 신호전달 과정에서 SIRT1 유전자는 p53 tumor suppressor 단백질을 탈아세틸화시킴으로써 세포의 사멸을 줄일수 있다. DNA에 손상이 발생하면 Ku70같은 수복단백질들과 같이 손상받은 곳으로 이동한다. 이때 SIRT1도 함께 이동 되므로 SIRT1과 Ku70의 결합여부를 알수 있는것이다. SIRT1은 Ku70과 결합하여 탈아세틸화 시켰고, 이로 인하여, DNA 복구활성을 증가시킨다. 반면 dominant-negative SIRT1이나 SIRT1 siRNA를 과잉발현시킬 경우 DNA복구 활성이 줄어든다. 이것은 SIRT1이 Ku70과 같은 DNA 수복단백질의 아세틸화를 조절하여 DNA 복구활성을 증가 시켰기 때문이다. 또한 세포의 자연사를 억제함으로써 세포 생존을 촉진하는SIRT1단백질의 작용이 AROS 단백질과 결합할 p53의 탈아세틸화를 촉진 하여 p53에 의한 세포주기억제 및 세포자연사 유도를 방해함으로써 세포의 생존을 증진시킨다.

참고 자료

1.Shamovsky I, Nudler E. 2006 Sci STKE. 355, pe40.
2.Colell, et al., 2007. Cell. 129, 983-997.
3.Wieler et al., 2003 J Biol Chem 278:18914-18921.
4. Michishita, et al., 2005. Mol Biol Cell. 16, 4623-4635.
5."SIRT1, an Anti-Inflammatory and Anti-Aging Protein, is Decreased in Lungs of Patients with COPD", Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2008