(PCR)Polymerase chain reaction &Agarose Gel Analysis (중합연쇄반응)

소개글

(PCR)Polymerase chain reaction &Agarose Gel 에 관한 실험보고서 입니다.

목차

1. Title
2. Date
3. 실험 목적
4. 실험이론
5. 실험 재료 및 실험방법
6. Result
7. Disscussion

본문내용

PCR(중합효소연쇄반응) 이란 특정 DNA를 특이적으로 반복 합성하여 시험관내에서 원하 는 DNA분자를 증폭시키는 방법으로서 아주 적은 양의 DNA를 이용하여 많은 양의 DNA 합성이 가능하므로 분자생물학적으로 제한효소의 발견만큼 획기적인 것이라고 할 수 있 다. 증폭시킨 DNA는 agarose gel이나 polyacrylamide gel상에서 뚜렷하게 보이는 band 로 가시화 할 수 있다.

*PCR 과정
Template denaturation
90℃~96℃로 가열하여 double strand DNA를 single strand DNA로 분리시킨다. 높은 온도일수록 Taq pelymerase도 온도가 아주 높은 상태에서는 활성도가 낮아질 수 있으 므로 보통 94℃로 쓴다. Cycle의 처음은 확실한 변성을 위해 약 5~10분간 시간을 주어 야 한다.
Primer annealing
annealing온도는 Tm값에 따라 범위가 다양하다. 염기간의 결합은 G와 C는 세 군데에서 결합이 일어나고 A와 T는 두 군데에서 결합이 일어나므로 G+C비율에 따라 결합 온도에 변화를 주는 것이 좋다 (GC비율이 높으면 Tm값이 커지므로 annealing temprature를 높 여주어야 한다. 일반적으로 GC contents가 50%가 되는 primer쌍을 이용하는 것이 바람 직하다.
DNA polymerization
70℃~74℃에서 수행하며 원하는 PCR 산물의 크기가 크거나 반응요소의 농도가 낮을 때는 시간을 연장시킬 수도 있다. Taq DNA polymerase는 보통 1분에 2,000~4,000nucleotide를 합성할 수 있으므로 원하는 산물의 크기 1kb마다 1분 정도의 시간을 배당하면 충분히 반응이 일어난다.

*Agarose gel electrophoresis에서 고려해야할 사항
1. The electrophoretic migration rate of DNA
2. The molecular size of the DNA
3. The agarose concentration
4. The conformation of the DNA
5. The applied current
6. Base composition and temprature

5. 실험 재료 및 실험방법

*실험재료
Template DNA(증폭의 대상이 되는 DNA), 한 쌍의 primer(증폭할 부분을 잡는 짧은 oligonucleotide), dNTP(dATP, dCTP, dGTP, dTTP : 유전자를 합성하는 재료가 되는 nucleotide), Taq polymerase(열에 특별히 강한 유전자 합성효소 : Thermophile에서 추 출)-이상 PCR 재료

참고 자료

*생명공학 기초실험1 실험서(연세대학교 공과대학 생명공학과)
*생명공학 기초실험2 실험서(연세대학교 공과대학 생명공학과)
*네이버 지식인