DNA transformation into E.coli

소개글

DNA transformation 실험 일지입니다..
실험목적, 실험개요, 실험방법, 실험결과, 고찰까지
자세히 기록되어 있습니다
과제 제출 만점 받고 A+받은 report입니다

목차

실험명
일시
목적
개요
재료 및 방법
결과 및 고찰

본문내용

목적 :
1. E.coli 배양을 위한 영양분을 가진 LB배지를 만들고,
2. 준비된 벡터(pCAMBIA 3300)를 competent cell(E.coli)내부로 삽입하고.
3. 벡터를 형질전환시킨다.

개요 :
DNA를 세균의 세포내로 직접 삽입하여 복제하고 발현하게 하는 일을 형질전환(transformation)이라고 부른다. 이것은 고전적인 미생물 유전학에서도 알려져 있었는데 폐염쌍구균의 병원성 균주의 형질전환현상을 통하여 유전자의 본체가 DNA라는 것이 Avery에 의해 1944년에 밝혀졌고 그 후 Bacillius subtilis에도 형질전환현상이 발견되어 미생물의 유전자 해석이나 개량등에 이용되었다.
그러나 고전적인 형질전환의 한계는 DNA의 이입이 동종의 균주 사이에서만 가능하다는 것이었다. 예를 들면 Bacillius subtilis의 균주에서 추출한 DNA를 다른 Bacillius subtilis의 균주에 널어 성질을 변하게 하는 것은 가능하지만 e.coli의 DNA를 Bacillius subtilis에 삽입하는 타종 DNA의 이입은 1970년 초기에는 불가능하였다.
형질전환에 있어 가장 중요한 것은 외부에서 유입된 DNA가 수용체 염색체상의 상동부위와 유전적 교환을 일으켜 염색체의 일부가 됨으로써 다음세대로 유전되는 것이다.
특정 길이의 DNA를 복제해야 할 필요가 있는 경우 여러 가지 방법으로 이루어지는데 가장 간단한 방법이 DNA를 분열속도가 빠른 박테리아에 주입하는 것이다. 주입한 DNA를 받아들인 박테리아가 DNA복제를 할 때 주입된 DNA도 같이 복제되는데 transformation은 박테리아가 죽은 박테리아의 DNA 혹은 제한효소 처리를 한 DNA를 세포막을 통하여 세포 내부로 끌어당겨 자연적으로 흡수하는 과정을 거치게 되며, 실험실에서 전기적인 자극, 또는 heat shock을 통하여 강제로 세포가 수용하게 만들 수 있다. 유입된 DNA가 재조합이 되어 새로운 DNA가 되면 박테리아가 다른 종류로 전환하게 되는데 이 때문에 transformation이라는 용어가 생겨났다. 이는 DNA가 유전물질이라는 것을 입증하는 증거가 되고, 사람과 같이 복잡한 생물체에서 얻은 DNA를 이용하여 실험실에서 쉽게 연구할 수 있게 되었다.

참고 자료

없음