[분자생물학]Purification of DNA from Living Cells

소개글

세포로부터 DNA를 정제하는 과정에 대한 설명을 한 레포트입니다.

목차

1. Total cell DNA의 분리
(1) 세균 배양물의 증식 및 수확
(2) 세포 추출물의 분리
(3) 세포 추출물로부터 DNA의 정제
(4) DNA 샘플의 농축
(5) DNA 농도의 측정
(6) 세균 이외의 생물체로부터의 total cell DNA의 분리
2. 플라스미드 DNA의 분리
(1) 크기에 기초한 분리
(2) conformation에 기초한 분리
(3) 플라스미드 증폭
3. 박테리아파지 DNA의 분리
(1) 높은 λ 농도(titre or titer)를 얻기 위해 배양물을 증식시키는 방법
(2) 비용원성(non-lysogenic) λ 파지의 제조
(3) 감염된 배양물로부터 파지의 수집
(4) λ 파지 입자로부터 DNA의 분리
(5) M13 DNA의 분리
4. 참고문헌

본문내용

유전 공학을 위한 DNA분리는 3가지 유형으로 구분할 수 있다.
제 1 Type : 세포 전체 DNA(total cell DNA)이며 클로닝될 유전자를 얻기 위해 필요
제 2 Type : 순수한 플라스미드 DNA이며 분리방법은 기본적으로 total cell DNA분리와 같지만 어느 단계에서는 염색체 DNA와 분리되어야 한다.
제 3 Type : 파지 DNA이며 파지 클로닝 벡터로 이용될 때 필요. 파지 DNA는 감염세포로부터 보다는 파지 자체에서 분리되는 것이 일반적이기 때문에 세균 DNA에 의해 오염되는 문제는 없다. 그러나 파지 캡시드(단백질)를 제거하기 위해선 특수한 방법이 필요하다. 예외적으로 대장균(E. coli) 세포로부터 M13의 dsRF를 분리할 때는 플라스미드 분리 때와 같은 방법이 사용된다.

1. Total cell DNA의 분리
세균 세포의 배양물로부터 total DNA를 준비하는 방법은 4 단계로 나눌 수 있다.
• 세포배양액 : 증식, 수확(원심분리 이용)
• 세포파괴 : 내용물 방출
• DNA만 분리 : 단백질 제거(페놀 처리), RNA제거(Rnase 처리)
• DNA 농축 : 2 Vol.의 에탄올(EtOH) 처리

(1) 세균 배양물의 증식 및 수확
1) Defined medium : 배지의 모든 구성성분이 알려져 있는 배지로 정밀하게 통제되는 조건에서 세균 배양물을 증식시켜야 할 때 사용
2) Undefined medium : 배지의 구성성분에 대한 자세한 성분명과 함량이 알려져 있지 않은 배지로 단순히 DNA분리를 위한 경우에 적절

참고 자료

Gene Cloning & DNA Analysis An Introduction 5th Ed. by T A Brown by alive p.28~53『Chapter 3』
유전자 클로닝과 DNA 분석 입문서 번역