DNA cloning (ligation) Restriction analysis of plasmid DNA
- 최초 등록일
- 2010.05.24
- 최종 저작일
- 2009.08
- 4페이지/
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소개글
제한효소를 이용하여 vector에 특정 염기서열 인식하는 유전자가 삽입되었는지 살펴보는 실험이었습니다.
■ 제한효소 인식서열
1. EcoR Ⅰ
2. Hind Ⅲ
3. BamHI
■ Sticky end
■ blunt end
■ PGEM - T Easy vector
위의 4가지에 대한 discussion이 있답니다.
많지는 않지만 실험 중간에 찍은 사진도 함께 넣었습니다.
목차
없음
본문내용
Purpose
제한효소를 이용하여 vector에 특정 염기서열 인식하는 유전자가 삽입되었는지 살펴본다.
Material
실험복, 실험용 장갑, 튜브, 튜브꽂이, 피펫, 2X buffer, ligase, T-vector D.W, ligation DNA, 10X buffer, EcoR, incubator Ⅰ
Method
* ligation
1. 2X buffer 5μl
2. DNA 3.5μl
3. ligase 1μl
4. T-vector 0.5μl
---------------------------
1. 얼음 위에서 위의 조성대로 넣는다.
2. Tapping해 준 후 spin down 한다.
3. 16℃에서 over night 한다.
* Restriction enzyme analysis
1. D.W 5.7μl
2. ligation DNA 3μl
3. 10X buffer 1μl
4. EcoR Ⅰ 0.3μl
---------------------------
1. 얼음 위에서 1.5ml tube에서 넣는다.
2. tapping해 준 후 spin down 한다.
3. 37℃ incubator에서 1시간 반응시킨다.
4. 전기영동을 한다. (100V, 25min)
Result
* 9.10번째 vector가 선명하게 나온 것을 확인할 수 있다.
Discussion
■ 제한효소 인식서열
1. EcoR Ⅰ
GAATTC
CTTAAG
2. Hind Ⅲ
AAGCTT
TTCGAA
3. BamHI
GGATCC
CCTAGG
■ Sticky end
restriction enzyme에 의해 처리된 DNA fragment의 말단에서 하나의 DNA strand가 더 길게 신장된 부분으로 그것은 다른 sticky end와 상보적인 염기쌍을 형성하여 결합할 수 있기 때문에 붙여진 이름
참고 자료
http://blog.naver.com/callion?Redirect=Log&logNo=90046692239
http://blog.daum.net/dreamgg01/1310?srchid=BR1http%3A%2F%2Fblog.daum.net%2Fdreamgg01%2F1310
http://www.promega.com/paguide/images/1473VA05_6A.jpg
http://library.thinkquest.org/04apr/00774/en/rDNA_clip_image002_0003.jpg
http://www.uic.edu/classes/phar/phar331/lecture5/image15.gif
http://kin.naver.com/detail/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&docid=400357&qb=VC12ZWN0b3I=&enc=utf8§ion=kin&rank=1&sort=0&spq=1&pid=fXUR6z331zsssv0DRzGssv--349317&sid=SuXUK3K55UoAADy8I3c