Bradford assay

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목차

1. Subject
2. Object
3. Introduction
4. Materials & Methods

본문내용

1. Subject
Bradford assay를 이용한 단백질 정량

2. Object
수용액에 녹아있는 단백질의 양을 Bradford 방법으로 정량한다. 이를 위해 표준 용액을 이용한 표준 곡선의 작성과 비색정량법을 습득한다.
3. Introduction
① Bradford : 산성용액에서 Coomasie brilliant blue 염료는 단백질과 결합하게 되고, 이로 인해 염료의 최대 흡광도(λmax)는 465nm에서 595nm로 이동하게 된다. 따라서 595nm에서 흡광도는 단백질의 농도와 비례하게 된다. 이 방법은 발색반응이 2분 이내에 완결되며, 1시간까지 안정성이 유지된다. Bradford 방법의 감도는 Lowry 방법보다 좋으며, 미량정량법(microassay)을 사용하면 1～20ug의 단백질량을 측정할 수 있다. Bradford 방법은 빠를 뿐만 아니라 비 단백질 성분들에 의한 방해도 거의 없다.
Lowry : 단백질 정량에 있어서 Lowry법의 감도는 비교적 넓게 적용되기 때문에 오랫동안 광법위하게 이용되고 있다. 이 방법은 알칼리성에서 단백질의 peptide 결합과 구리가 반응하여 Cu+이온을 생성하는 Biuret 반응의 원리를 이용한 것이다.

참고 자료

없음