대장균의 DNA 분리·분석과, 제한 효소를 이용한 λ DNA 분석

소개글

대장균의 DNA 분리·분석과, 제한 효소를 이용한 λ DNA 분석

목차

서 론
실험 재료 및 방법
결 과
고 찰

본문내용

서 론
DNA는 생명체의 기본 유전정보를 가지는 물질로써 생명체 하나의 개체는 DNA에 기인한다고 말할 수 있다. DNA는 이처럼 생명체를 결정짓는 중요한 물질로써 연구를 통하여 다양한 유익한 활동들을 창출 할 수 있다. 실제적으로 DNA연구를 통한 유전공학의 발달로, 난치병의 치료, 생산량 확대 등 셀 수 없는 곳에서 DNA 연구가 도움을 주고 있다. 무엇보다도 DNA기술은 앞으로 무한한 가능성을 내포한다는 점에서 앞으로 인류의 핵심 기술 중 하나가 될 것이라 과감히 예측할 수 있다. 하지만 사용방법에 따라 매우 위험한 기술이 될 수 있는 이 물질을 올바르게 사용하기 위해서는 어떻게 다루어야 하는지 아는 것이 매우 중요할 것이다. 이번 실험에서는 이것의 기초가 되는 DNA의 분리와 분석하는 가장 기본적인 방법 중 하나인 전기영동에 대해 다뤄보고자 한다.

실험 재료 및 방법

DNA 분리
DNA를 E.coli로부터 분리하기 위해 미리 준비된 E-tube안의 대장균 배양액을 원심분리기하에(7500rpm) 돌린 후에 상층액을 제거했다. 상층액을 제거한 대장균 배양액을 180 μl, ATL buffer와 20μl의 proteinase k와 함께 피펫을 이용하여 섞은 뒤에 vertexing하고 56℃도 하에서 30분간 incubate했다. 200μl의 AL buffer와 200μl의 에탄올(96~100%)을 샘플에 넣은 뒤 다시 vortexting 했다. 혼합물을 Dneasy Mini spin column에 넣은 뒤 2ml collection tube를 연결하여 원심분리기에서 1분간 (8000 rpm) 돌린 뒤에 결과물이 쌓인 Dneasy Mini spin column에 새로운 2ml collection tube를 연결하고 500μl의 buffer AW1을 넣고 다시 원심분리기에 1분간(8000 rpm) 돌렸다. 다시 한번 2ml collection tube를 교체하고 500μl의 buffer AW2를 넣고 3분간 원심분리기에(14,000rpm)에 돌렸다. 결과물이 담긴 Dneasy Mini spin column을 1.5ml E-tube에 옮기고 200μl buffer AE를 membrane위에 피펫팅하여 결과물을 모았다. 1분간 실온에서 incubate 한 뒤 1분간 원심분리기를(8000rpm) 이용하여 돌렸다. 이 앞의 과정을 2번 시행하여 각각 3ml의 E.coli 배양액으로부터 DNA와 4.5ml의 E.coli 배양액으로부터의 DNA를 얻었다.

참고 자료

없음