[분자생물학실험] DNA cloning

소개글

DNA cloning

목차

1. 실험 목적
2. 실험 순서에 따른 목적
3. 실험원리
4. 실험재료
5. 실험방법
6. 실험결과
7. 고찰

본문내용

1. 실험 목적
: cloning이라는 실험으로 우리가 목적하는 Scr protein을 정제할 수 있는 재조합 vector를 만 들 수 있다.

2. 실험 순서에 따른 목적
1) Enzyme digestion and gel loading
: Colning을 하기 위해 vector와 insert를 제한효소로 자를 수 있다.
2) Gel extraction and ligation
: 자른 DNA를 agarose gel로부터 purification을 통해 분리할 수 있다.
: vector와 insert를 T4 DNA ligase를 가지고 ligation할 수 있다.
3) Transformation
: ligation 시킨 plasmid를 competent cell에 transformation할 수 있다.
4) DNA prep
: transformation한 colony에서 DNA를 얻어서 enzyme digestion을 통해 ligation이 제대로 이루어 졌는지 확인 할 수 있다.

3. 실험원리
1) 용어 설명
1-1) restriction : 이질의 숙주 중에서 증식한 DNA의 침입을 받았을 때 그 DNA와 자기의 DNA를 식별하고 분해해 버리는 현상을 말하며, 그런 작용을 하는 효소를 제한효소라고 한다.
1-2) restriction endonuclease : 한마디로 DNA를 자르는 효소. (endonuclease란 말은 DNA나 RNA 그 가닥의 중간을 자르는 것임. exonuclease는 끝에서부터 잘라내는 것이다.)
1-3) EcoR I : restriction endonuclease 의 한 종류로써, GAATTC라는 염기서열만 있음 잘라버리는 효소. ( Escherichia coli(대장균) R주에서 분리해낸 제1효소)
1-4) SalⅠ: restriction endonuclease 의 한 종류로써, GTCGAC라는 염기서열만 있음 잘라버리는 효소.
1-5) restriction digest : 이 제한효소들로 인해 DNA 혹은 RNA의 염기들이 무차별적이 아닌 일정한 부분에서만 잘리는 현상
1-6) ligation : DNA혹은 RNA와 같은 염기서열 사이에 끊어진 공간을 연결하는 과정. 이 과정은 ligase enzyme이 수행한다

참고 자료

1)Molecular biology 3rd ed. David P. Clark
2)Lehninger biochemistry, 1996.8.28