[분석 및 기기분석 실험] Restriction enzymes and DNA agarose gel

소개글

Restriction enzymes and DNA agarose gel

목차

1. Introduction & Theory
Ⅱ. Experimental
Ⅲ. Data & Calculations
Ⅳ. Results & Discussion

본문내용

1. Introduction & Theory
◎ 제한효소의 표준 처리 조건
제한효소 1 unit은 1 ㎍의 DNA를 50 ㎕ 반응 용액에서 최적온도, 최적완충액 조건에서 1시간 만에 자를 수 있는 효소량 이다. 다소 과량 사용하여 반응 시간을 줄일 수 있고, 16시간까지 반응 시간을 늘려 제한효소의 양을 줄일 수도 이다. 이런 때는 각각 비특이적 활성 (star activity)의 우려가 있는지, 제한효소 활성이 16시간까지 지속되는지를 고려하여야 한다.
◎ Restriction Enzyme
DNA도 특정 부위를 절단할 수가 있는데 DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미한다. 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonuclease, endonuclease라고 부른다. Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소(restriction enzyme, restriction endonuclease)이며, DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고 인식한 서열부위 또는 그 근처에 존재하는 특정부위를 절단한다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포 내로 침입해 들어오는 바이러스와 같은 외부 DNA를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있는 것이며, 자신의 DNA는 절단부위의 염기(adenine, cytosine)를 Methylation시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA를 자를 수 없게 보호하고 있다. 제한효소는 여러 종류가 있는데, 보통 DNA 상에서 4개 이상의 대칭성 염기를 인식하면서 절단한다.
제한효소의 형태중 주요한 것이 두 개가 있다. 그 중 type I 은 특별한 서열을 인식하지만 target site 이외의 다른 곳을 자르고 type II 는 인식한 범위내에서만 자른다. 따라서 유전공학에서는 type II를 이용하고 있다. Type II 가 두 개의 단일가닥을 자를 때 두 가지 형태의 잘린 단편이 나타난다.
①대칭면의 중심이 잘리는 경우 (blunt end, flush end)
②대칭면의 주위가 잘리는 경우 (sticky end, cohesive end, 5`-overhang end)
제한효소는 냉동고에서 꺼냈을 때 바로 얼음에 보관하는 것이 좋다. 제한효소는 효소 반응 용액에 맨 마지막으로 넣어야 하며, 첨가 전에 반응액을 잘 섞어 첨가된 물질이 골고루 섞이게 해야 한다. 효소 사용량은 자르고자 하는 DNA의 특성에 맞게 조절하여야 한다.

참고 자료

없음