[생물학및실험] plasmid DNA 추출

소개글

plasmid DNA 추출 실험에 관한 보고서 입니다.

목차

1. 실험의 목적 및 이론적 배경
(1) 실험목적
(2) 이론적배경

2. 실험재료 및 기구

3. 실험방법

4. 실험결과

5. 고찰

6. 참고문헌

본문내용

1. 실험의 목적 및 이론적 배경
(1) 실험목적
1. 배양된 대장균을 이용하여 플라스미드 DNA를 추출할 수 있다.
2. 추출한 DNA의 농도와 순도 측정방법과 원리를 이해한다.

(2) 이론적배경
○ Plasmid DNA 정제
어떤 플라스미드 또는 재조합된 플라스미드 DNA를 대장균 속에 넣고 대장균을 배양한 후 세포를 파괴하여 균체내에서 증폭된 플라스미드를 추출하고 정제하는 방법이다.
균체를 파괴시킨 후 원하는 플라스미드 DNA 만을 대장균의 염색체 DNA로부터 분리해 내는 것이 중요하다. 대장균의 염색체 DNA가 플라스미드 DNA 보다 훨씬 크다는 점과 열이나 알칼리 처리 후 얻어지는 염색체 DNA는 여러군데가 잘려진 선형의 DNA인 반면 플라스미드 DNA는 원형이라는 점을 이용하여 분리한다. Ethidium bromid와 같은 염료를 처리할 경우 원형 DNA는 선형 DNA보다 훨씬 적게 염료가 결합되어 지므로 cesium chloride를 이용한 원심분리를 할 경우 상대적으로 높은 밀도구배에서 띠를 형성하게 된다. 이 원리를 이용한 플라스미드 정제는 고순도의 DNA가 대량으로 요구 될 경우에 이용되며 대규모 정제라고 한다.
그러나 이 방법은 많은 시간과 노력이 필요하며 유전자 재조합 기술의 발달과 함께 제한효소를 이용한 DNA절단, 접합, 형질전환, 염기서열 결정과 같은 용도를 위한 플라스미드 DNA는 적은양의 배양액으로 부터 정제하는 저순도의 DNA만으로도 충분하다. 이 경우에는 소규모 정제를 시행하도록 한다.

○ Alkali lysis method
소규모 정제 방법 중 가장 보편적으로 사용되는 방법이다.
기본적이 원리는 세균의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA만을 분리해 내는 것이다. 이때 중요한 것이 세균이 원래 가지고 잇는 chromosomal DNA와 플라스미드 DNA를 구분해 내는 것이다. Alkali lysis method의 원리는 다음과 같다.

참고 자료

1. 한국생화학회, 1999, 실험생화학, 탐구당, p101-104, 331
2. 오계현외 3인공저, 2000, 미생물학실험, 신광문화사, p210-217
3. 무라오 사와오, 2001, 응용미생물학, 동화기술, p316-317