생물] 박테리아 형질전환 보고서

소개글

생물교육론 과제입니다. ~

목차

Ⅰ. 실험목적
Ⅱ. 서론
Ⅲ. 실험방법
Ⅳ. 실험결과
Ⅴ. 토의
Ⅵ. 참고문헌

본문내용

선택표지인자는 형질전환된 세포에 새로운 특징을 제공하는 유전자이며, 비형질전환체는 이러한 특징을 가지고 있지 않다. 선택표지인자를 가진 가장 대표적인 플라스미드로 ampicillin 저항성과 tetracycline 저항성 유전자를 가진 pBR322이다. pBR322의 형질전환 실험 이후, pBR322 플라스미드를 도입한 대장균(E. coli) 세포만이 ampRtetR이 될 것이며, ampicillin 혹은 tetracycline을 포함하는 고체(agar) 배지에서 콜로니를 형성할 수 있다. 여전히 ampStetS인 비형질전환체는 선택배지에서 콜로니를 생성하지 못한다. 그러므로 형질전환체와 비형질전환체는 쉽게 분리된다.
대부분의 플라스미드 클로닝 벡터는 숙주에서 항생제에 저항성이 있는 유전자를 적어도 하나 이상 운반하며, 적절한 항생제를 포함하는 아가 배지에 배양함으로 얻어지는 형질전환체를 선택한다. 항생제 저항성은 형질전환된 세포 내에 플라스미드가 존재하기 때문에 나타난 결과이므로, 플라스미드의 저항성 유전자가 발현되고, 그래서 항생제를 해독하는 효소가 합성되어야만 항생제 저항성을 갖게 된다. 저항성 유전자의 발현은 형질전환 후 즉시 시작되지만 세포가 항생제의 독성에 저항하는 효소를 충분히 함유하기까지는 수 분의 시간이 요구된다. 이러한 이유로 형질전환된 박테리아는 열충격(heat-shock) 처리이후 즉시 항생제를 포함한 선택배지에 배양해서는 바람직한 결과를 얻기 힘들다. 먼저 항생제가 없는 액체배지에서 짧은 시간 동안 항온(incubation)시켜 세포 내에 저항효소를 축적한 후에야 선택배지에 박테리아를 배양해야 한다.

(3) 의 역할은?
competent cell을 이용한 transformation의 과정 중 박테리아에 CaCl2를 처리하여 competent cell로 만들면 plasmid가 cell에 들어갈 수 있게 된다. 여기에 Heat shock를 가하면 plasmid가 cell 안으로 들어가는 효율이 증가된다.

(4)Competent cell이란?
정상적인 bacteria에 화학적 처리를 가하여 외부DNA가 용이하게 들어갈 수 있게 만든 cell을 의미한다. 화학처리에 쓰이는 시약에는 Calcium Chloride, ManganaseChloride, Hexammine-cobalt Chloride, Dimethyl Sulfoxide (DMSO)가 있다. 일반적으로 사용되는 시약은 Calcium chloride가

참고 자료

생물학실험서(라이프사이언스)
네이버 백과사전
생명과학 8판(바이오사이언스)