재조합 DNA 구축 및 형질전환

소개글

재조합 DNA 구축 및 형질전환

목차

1.실험제목
2.실험목적
3. 이론
(1)형질전환
(2)제한효소
(3)형질전환 방법: 2가지 (Electroporation, Chemical method)
(4)Competent cell
(5) TSS method

본문내용

1. 실험제목 : 재조합 DNA 구축 및 형질전환
2. 실험목적 : 재조합 DNA를 이용하여 대장균에 주입하여 제대로 형질전환 된 대장균만을 선별하는 방법을 습득하고, 그들을 대량 배양한다.
3. 이론
(1)형질전환
형질전환(transformation)이란 외부로부터 주어진 DNA에 의해 개체 또는 세포의 형질이 유전적으로 변화하는 현상을 말한다. 특히 박테리아 세포 안으로 plamid DNA를 넣어주어 형질전환 시킬 때, E.coli가 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 상태로 만들어 준 후에 열 충격(heat shock)이나 전기 충격을 주어 이루어지게 된다. 이렇게 E.coli가 외부의 DNA를 받아들일 수 있는 상태로 만들어 준 세포를 competant cell이라고 한다. 이러한 조건을 이용하여 유전형질을 변화시키는 것이 미생물의 형질전환(transformation)이라고 한다.

(2)제한효소
1)제한효소란?
DNA의 특정한 염기배열을 식별하고 2중사슬을 절단하는 엔도뉴클레아제(핵산분해효소의 하나)로서 유전공학에서 재조합 DNA를 만들기 위해서 사용하는 특수한 효소로 알려져 있다. 여기서 제한이란, 이질(異質)의 숙주(宿主) 중에서 증식한 DNA의 침입을 받았을 때 그 DNA와 자기의 DNA를 식별하고 분해해 버리는 현상을 말하며, 그런 작용을 하는 효소를 말한다.
이에 반하여 제한효소가 인식하는 염기배열 중의 특정한 염기를 하여 제한을 받지 않는 상태로 DNA를 일시적으로 변화시키는 현상을 수식(修飾)이라고 하고, 이런 작용을 하는 효소를 수식효소라고 한다.
2)제한효소의 종류
1) Type I restriction enzyme
DNA의 특정부위를 인식하긴 하지만 인식된 부위가 아닌 다른 부위를 절단한다. 즉, 인식부위는 특이성을 가지지만 그로부터 약 1,000 base pair가 떨어진 부위를 절단하기 때문에 원하는 부위를 선택하여 자르기가 어렵다. 따라서 이 효소들은 박테리아의 기능에는 중요하지만 실험목적으로는 잘 사용되지 않는다.
2)TypeIIrestrictionenzyme
인식부위와 절단부위가 모두 특이성이 있는 제한효소이므로 분자생물학 연구에 아주 유용하게 이용되고 있다. 실험에 쓰이는 제한효소는 특별한 말이 없는 한 type II를 말한다. 대부분의 type II 제한효소는 4개, 5개, 또는 6개의 염기서열을 인식하는데, 이에 따라 DNA 상에 인식부위가 나타나는 빈도가 달라지 게 된다.

참고 자료

http://www.cambio.co.uk/catalogue-Transformation_and_Storage_Solution_TSS_-11-203
http://www.epibio.com/item.asp?ID=369&CatID=3&SubCatID=32http://kin.naver.com/detail/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=ux/hx5AcwH86YvZhSyDEehwPKJXUM1NR&qb=67aE7J6Q7IOd66y87ZWZ6rSA66Co7KeI66y4&enc=utf8&pid=fNpRkloi5TGssvDfTuKsss--516791&sid=ScoMYrDyyUkA
http://kin.naver.com/detail/detail.php?d1id=11&dir_id=110205&eid=2OREoVS5nudCUl4soGus44QTs2b+YDcF&qb=wabH0ci/vNLAxyDBvrf5&pid=fL%2BCvsoi5UKssZkqwThsss--388390&sid=SN%40fuvGb30gAAGBlrwk