Total RNA isolation from tissues & reverse transcription for the cDNA synthesis from RNA
- 최초 등록일
- 2009.12.23
- 최종 저작일
- 2009.10
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소개글
배양세포에서 total RNA를 분리하는 방법과 분리한 RNA의 양과 질을 측정하고 Reverse Transcription 하는 실험보고서
목차
1. abstract
2. introduction
3. material & method
4. result
5. discussion
6. reference
본문내용
Abstract
이번 실험은 배양세포에서 total RNA를 분리하는 방법과 분리한 RNA의 양과 질을 측정하고 Reverse Transcription 하는 것이다. 배양세포는 DH5α를 사용했고 guanidinium thiocyanate phenol chloroform extraction 방법을 통해 RNA를 분리하였으며 M-MLV RTase를 효소로 Reverse Transcription을 하였다. 실험결과 O.D 260의 값이 0.526으로 RNA의 농도는 1.052 μg/μl이고 O.D 260 / O.D 280 의 값이 1.49로 깨끗한 RNA를 얻지는 못했다.
Introduction
RNA는 base, 오탄당, 인산이 한 분자씩으로 결합된 nucleotide의 긴 사슬로 연결된 분자 형태이며 ribonucleic acid라고도 한다. DNA와의 다른 점은 구성성분에서 오탄당이 ribose일 때 RNA라 하고, deoxyribose이면 DNA라고 하며 DNA는 base를 thymine을 갖는 반면 RNA는 base를 uracile을 가진다. 따라서 RNA를 구성하는 nucleotide의 4가지 base는 adenine, guanine, cytosine, uracile이다.
nucleotide의 배열순서가 달라지면 RNA의 종류도 다르게 된다. 다시 말해 RNA의 종류라는 것은 nucleotide의 배열순서인 것이다. 때문에 RNA에는 매우 많은 종류가 존재한다. 보통 RNA는 nucleotide가 수십에서 수백 개 연결되어 있다. 대부분 생물의 유전자는 DNA이지만 일부의 virus는 RNA가 유전자 역할을 한다. RNA는 rRNA, tRNA, mRNA로 구분할 수 있다.
rRNA는 ribosome을 구성하고 있는 RNA인데 세포 모든 RNA의 약 80%를 차지한다. rRNA는 핵 안의 인에서 transcription되는데 인은 rRNA와 단백질을 합쳐 ribosome을 합성하는 곳이다. 이렇게 합성된 ribosome은 핵 안의 인에서 나와 세포질에서 단백질합성에 참여한다.
참고 자료
Watson, Molecular biology of the gene, CSHL Press, 2008, p.127
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