DNA elution

소개글

double-strand DNA 분석에서 널리 사용되고 있는 agarose gel 상에서 분리된 DNA로부터 DNA 절편을 회수하는 방법을 이해하고 cloning에 사용할 insert를 준비하는 실험보고서

목차

1. abstract
2. introduction
3. material & method
4. result
5. discussion
6. reference

본문내용

Abstract
이번 실험은 double-strand DNA 분석에서 널리 사용되고 있는 agarose gel 상에서 분리된 DNA로부터 DNA 절편을 회수하는 방법을 이해하고 cloning에 사용할 insert를 준비하는 것이다. DNA는 electrophoresis를 통하여 agarose gel 상에서 주로 크기에 따라 분리가 되는데 이러한 성질을 이용하여 원하는 크기의 DNA를 순수하게 분리하는 것이 가능한 것이다. 본 실험에서는 이전 실험(Polymerase chain reaction)에서 얻은 산물이 없으므로 다른 vector와 insert를 사용하였다. 미리 잘라서 준비된 절편을 ligation을 위한 insert를 만들었고 다시 한 번 electrophoresis를 통해 밴드를 확인하였다. 실험결과 band가 나타났음을 관찰할 수 있었다.

Introduction
DNA elution은 agarose gel로부터 cloning에 사용할 DNA를 분리하기 위해 DNA를 회수하는 실험이다. 이 방법은 recombination DNA를 만들 때 대단히 중요하게 쓰이는 기술로서 보다 회수율이 높고 elution된 DNA를 보다 빠르고 간편하게 실행할 수 있는 방법이 계속적으로 개발되고 있다.
agarose gel로부터 DNA를 분리하는 gel extraction은 그 종류가 다양한데 각 방법마다 그 장점과 단점이 존재한다. Gel extraction은 크게 Low-melting temperature(LMT) agarose method와 Electroelution, High salt extraction, freeze squeeze로 나눌 수 있다.
LMT agarose method는 낮은 온도에서도 녹는 특별한 agarose를 사용해서 액체 상태로 만든 후 용액에 녹은 DNA를 회수하는 방법으로 장점은 별도의 kit 없이도 낮은 온도에서 gel을 녹일 수 있는 것이다. 하지만 이것은 고가의 LMT agarose를 따로 구입해야 하는 단점이 있다.

참고 자료

Sambrook , Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2005, pp.518~522
김영설, 유전자 진단의 이론과 실제, 도서출판 한의원, 1999, pp.41~46
KIST 생명공학연구소, 분자생물학노트, 도서출판 한림원, 1998, pp.37~42