생화학 실험 2 후반부 : 2주차 : Purification of Thermostable DNA polymerase
- 최초 등록일
- 2009.10.05
- 최종 저작일
- 2008.05
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소개글
연세대학교 생화학 실험 2 전반부 5주차 실험에 대한 리포트입니다.
목차
1. 실험 제목
2. 실험일자
3. 제출자 및 공동실험자:
4. 목적
5. 원리
6. 시약 및 기자재:
7. 방법:
8. 결과:
9. 고찰
10. 참고문헌
본문내용
(1) Taq Polymerase에 대하여...
Taq polymerase는 온천수에 사는 E.coli인 Thermus aquaticus로부터 추출된 91kDa protein이다. 이 enzyme은 열에 매우 안정한 것이 가장 중요한 특징인데 이러한 특징 때문에 74에서 DNA replicate를 수행할 수 있고 95에서 반감기가 40분이나 된다. 이 효소는 마그네슘 존재 하에 DNA template을 따라 DNA 복제를 촉매하는 역할을 한다. 복제 중 RNA primer를 때어 내는 시기에는 5‘3’ 방향의 exonuclease activity를 보인다. 그러나 3‘5’ 방향의 exonuclease activity를 보이지 않기 때문에 proof reading 작업을 할 수 없다. 따라서 DNA 중합 시 error를 잘 생성하기도 한다. 이 효소는 여러 가지 최적 반응 조건을 가지고 있는데 우리는 그러한 반응 조건들 중에서도 50~55mM KCl 조건을 잘 맞춰주며 실험할 것이다.
(2) Protein의 특성과 그것이 정제 전략에 미치는 영향에 대하여...
Protein은 매우 여러 가지 특성을 지닌다. 이러한 여러 가지 특성들은 protein을 purification 시키는데 있어서 매우 중요한 역할을 한다. 이러한 protein의 특징들에는 열 안정성, pH 안정성, 유기 용매 안정성, Detergent requirement, Salt, Charge 특성 등 여러 가지가 있다. 우리는 이번실험에서 이러한 protein의 특성들 중에서도 Temperature stability, Salt(ionic strength), Charge properties 이 세 가지 성질들을 이용하여 protein을 정제할 것이다.
참고 자료
①생화학 실험(Ⅱ) 2008년도 1학기 전반부 Basic Tools for Molecular
Cloning 연세대학교 생화학과
②Stryer Biochemistry Sixth Edition Freeman
③Naver and other Internet site
④조교님께서 제공해주신 Procedure 수정 자료
