생화학 실험 2 전반부 : 7주차레포트 : PCR - mediated mutagenesis 2

소개글

연세대학교 생화학 실험 2 전반부 4주차 실험에 대한 리포트입니다.

목차

1. 실험 제목
2. 실험일자
3. 제출자 및 공동실험자:
4. 목적
5. 원리
6. 시약 및 기자재:
7. 방법:
8. 결과:
9. 고찰
10. 참고문헌
11. 숙제(Further study):

본문내용

(1) Characterization of PCR product
① PCR product는 일반적인 DNA와 다르게 5‘ 끝에 phosphate가 없다. 그 이유는 PCR product의 5’ 말단 쪽에는 primer가 위치하게 되는데 in vitro에서 제작되는 primer는 3‘에서 5’ 쪽으로 합성되기 때문에 5‘쪽에 phosphate를 가지지 않는다. 따라서 결과적으로 PCR product는 5’에 phosphate가 없다는 특징을 가진다.
② PCR product의 또 다른 특징은 Taq DNA polimerase에 의해 나타난다. Taq DNA polimerase는 terminal deoxynucleotidyl transferase에 대한 활성을 지니기 때문에 합성이 끝난 후 template와 상관없이 3‘ 말단에 A 염기를 지닌 nucleotide를 하나 더 붙인다. 이러한 특징은 후에 T-vector와의 interaction을 증진시키는데 이용되기도 한다.

(2) T-vetor에 대하여...
우리가 인위적으로 만들어 줄 수 있다. 이때 EcoR5로 vector의 원형을 잘라주고 dTTP, Taq DNA polimerase 등을 이용한 solution 내에서 A 염기를 지닌 nucleotide 대신 3‘쪽에 T 염기를 지닌 nucleotide를 붙여주게 된다. 이렇게 만들어진 T-vector는 다음 그림과 같이 여러 기능적인 site들로 구성된다.

(3) Lac Z을 이용한 selection

참고 자료

①생화학 실험(Ⅱ) 2008년도 1학기 전반부 Basic Tools for Molecular
Cloning 연세대학교 생화학과
②Stryer Biochemistry Sixth Edition Freeman
③Naver and other Internet site
④조교님께서 제공해주신 PPT 자료