Competent cell prep & Transformation of E. coli

소개글

Competent cell prep & Transformation of E. coli

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Material & Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

1. Abstract
- Ligation이 된 Vector와 Insert를 Competent cell의 상태로 만들어 준 E. coli에 주입하여 Ampicillin agar plate에 도말하여 배양 후 콜로니를 통해 Ligation이 잘 되었는지를 확인하는 실험이다. 대조군으로 D.W.를 Control으로 잡고 Insert와 Vector의 M비를 3:1, 9:1로 한 Ligation mixture를 사용했다.
실험 방법은 E. coli를 kit를 사용해 Competent cell의 상태로 만들어 주고 Control인 D.W.와 3:1, 9:1 M비의 Ligation mixture를 주입해준다. 그리고 Ampicillin agar plate에 도말해서 하루 동안 배양한 뒤 콜로니의 수를 측정한다.
결과는 Control에서는 아무런 콜로니가 뜨지 않았고 3:1과 9:1에서는 콜로니가 발견되었다. 3:1과 9:1의 Ligation 효율을 비교해 보면 9:1에서 더 많은 콜로니가 발견되었기 때문에 이번 실험에서는 9:1이 Ligation mixture가 더 효율이 높다고 말할 수 있지만 모든 실험에서 높다고는 말할 수 없다.
또한 Ligation mixture와 Competent cell을 비교하기 위해 조교누님께서 따로 한 실험에서는 모두 조교누님의 Ampicillin agar plate에서 더 많은 콜로니가 발견된 것으로 보아 예전의 Ligation mixture가 Ligation이 더 잘되었고, 형질전환 또한 잘되었다고 말할 수 있다.
이번 실험을 통해 M비율에 따른 Ligation의 효율을 알 수 있고, Ligation을 확인하기 위해서 Ampicillin agar plate에 배양함으로써 Ligation이 잘된 것은 Vector에 Ampicillin 항생제 내성 부위가 있기 때문에 콜로니 상태로 발견될 수 있다는 것을 알 수 있다. 또한 형질전환을 할 때에는 외래 DNA를 잘 받을 수 있도록 숙주 세포를 Competent cell 상태로 만들어줘야 한다는 것을 알 수 있다.

참고 자료

① http://blog.naver.com/mua6738?Redirect=Log&logNo=150035230778