단백질의 정량 분석 실험

소개글

단백질 정량 분석에 관한 기본적인 이론에 대한 설명과 방법을 설명,
각각에 방법에 대한 정량적 수치를 기록하였습니다.
실험적인 데이타를 표로 정리하고,
엑셀을 이용한 그래프 또한 첨부하여 두었습니다. 각각의 오차에 대한 원인을 고찰하고,
further study를 통해 좀더 깊은 discussion을 하였습니다.

목차

1. theory
2. method
3. materials and measurement
(1) protein reagent(Bradford)
(2) protein standard
4. data and result
5.Discussion
6. Further study
(1) Bradford assay에서 발색이 되어 595 nm에서 흡광도가 변하는 생화학적 기전은 무엇인가?
(2) 시료내 단백질의 양을 재는 방법에는 Bradford assay외에 어떤 방법들이 있으며, 어떠한 생화학적 반응에 의해서 이들 assay가 진행되는가?
reference

본문내용

세포를 이루는 분자는 단순한 구조와 기능을 가지고 있는 유기분자들이 모여서 거대분자 (macromolecule)를 형성한다. 세포 내 거대분자는 크게 4 종류로 나눌 수 있다: 단백질 (proteins), 탄수화물 (carbohydrates), 지질 (lipids), 핵산 (nucleic acid). 단백질은 원형질과 효소의 구성요소이며, 탄수화물은 에너지원으로 중요한 역할을 한다. 지질은 모든 생체막 (biomembrane)의 주요 성분이며 에너지원이다. 이러한 거대분자에 대한 생화학적인 확인과 구조에 대한 이해는 세포내 분자들의 기능 및 작용 기전을 분자 수준에서 이해하는데 필수적이다.
2. method

1) 단백질의 양을 모르는 시료 (milk)를 다음의 비율로 증류수를 이용하여 마지막 부피가 10 mL이 되게 희석한다: 0, 1/5000, 1/2500, 1/1000, 1/500, 1/100.
2) 각각의 희석된 시료로부터 200 μl씩 2개의 label된 시험관에 분주한다.
3) 단백질의 양을 알고 있는 standard solution (1 mg/ml BSA, bovine serum albumin)을 0, 10, 20, 40, 60, 80, 100 μl씩 각각 2 test tube에 분주한다.
4) 2)의 시료에 증류수를 첨가하여 마지막 부피가 200 μl이 되게 한다.
5) 각각의 standard tube와 시료 (희석된 우유)에 5 ml의 protein reagent를 넣고 거품이 생기지 않도록 parafilm으로 시험관을 봉한 뒤 천천히 뒤집으면서 섞어준다. 발색이 되도록 약 5분 정도 기다린다 (단, 30분을 넘지 않는다).
6) 595 nm의 파장에서 먼저 standard solution의 흡광도를 측정하여 기록하고, 시료의 흡광도를 측정, 기록한다.
7) Standard의 흡광도 수치를 이용하여 standard curve를 그리고 이 curve 에 맞추어 모른 시료 안의 단백질의 양을 거꾸로 계산한다.

참고 자료

- 네이버 블로그 : http://blog.empas.com/koo1016/11268192
- 네이버 : http://blog.naver.com/whwater?Redirect=Log&logNo=90010685122
- 일반 생물학 : Cambell 저서
- 일반 생물학 실험 -한국생물과학협회(아카데미서적1993)