[생화학 실험] 단백질 정량과 염석

목차

1. 실험제목
2. 실험일자
3. 제출자 및 공동실험자
4. 목적
5. 원리
1) Lowry method
2) Salting-in & Salting-out
3) 원심분리(centrifugation)
6. 시약 및 기자재
7. 실험방법
8. 실험결과
10. 참고문헌

본문내용

4. 목적
Lowry method과 Bradford method에 의해 단백질을 정량하는 방법을 배우고, salting-out에 대해 알아본다.

5. 원리
1) Lowry method
단백질에 대한 실험을 하는데 있어서 무엇보다도 그 농도를 아는 것이 중요하다. 단백질을 정량하는 방법 중 가장 널리 쓰이는 것은 ultraviolet(UV) spectrapfotometry, Lowry method, Biuret mrthod 방법이다. 먼저 UV에 의한 정량법은 단백질 내의 tyrosine과 tryptophan의 phenol과 indolic group에 의해 280nm에서 흡광하는 성질을 이용하는 것으로서 0.05-2mg/ml 정도의 단백질이 있어야만 하고 각 단백질들의 amino acid조성에 따라 그 값이 달라질 수 있다는 단점이 있으나, 가장 쉽게 측정할 수 있고 측정 후에 단백질이 변성되지 않으므로 정확한 양을 알기보다는 존재 유무 등을 확인할 때 쓰인다. 둘째로 Biuret method는 알칼리 조건하에서 구리 ion이 단백질의 peptide nitrogen과 peptide에 결합하여 540-560nm에서 흡광을 하는 보라색을 나타낸다. 이 반응은 UV방법과는 달리 구리가 peptide 에 결합하므로 단백질의 amino acid의 조성과는 관계없이 일정하나 단백질의 양이 1-60mg/ml 정도가 있어야 하므로 sensitivity가 낮다는 단점이 있다.

참고 자료

생화학, 김명순·김종화 외 11인, 형설출판사, 1999.
생화학 (상), 채범석 역, 서울외국서적, 1996.
기기분석, 김승재· 서성규, 동화기술, 1997
http://yasuar.hihome.com/wordhtm/proteinmethods.htm
http://www.rna.co.kr/Info/BiC.asp
http://nmr.kaist.ac.kr/chae/lecture_note/index.htm