Detecting the IgM in the dog serum with ELISA

소개글

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목차

실험 일시
실험 주제
실험 개요.
실험 과정 :
실험 결과 및 고찰
Spectrophotometer
종류

본문내용

실험 과정 :
1. coat with 50µl of Capture Antibody
- 오늘 사용하는 capture antibody는 Goat α-Dog IgM이다. 단어 그대로 antibody를 well에capture하는 과정이다. Capture Antibody로 처리한 후에 overnight해야 하므로 우리가 오늘 실험 전에 조교님께서 미리 처리하셨다.
2. wash 3 times with PBS-T
- PBS-T에는 0.05%의 Tween20이 포함되어 있다. Tween 20은 계면활성제로써 비누와 같은 역할을 한다. 따라서 혹시 남아있을지도 모르는 fat이나 lipid 등의 불순물을 제거하는 역할을 한다.
3. add 50µl of Blocking Reagent
- Blocking Reagent로는 3% BSA/PBS를 이용한다. Dog serum에 있는 IgM 이외의 물질들이 well에 결합하는 것을 막기 위해 미리 BSA로 well을 메우는 단계이다.
4. incubate for 1 hr at R.T
- 시간 관계상 이 과정은 10~15분으로 줄였다.
5. wash 3 times with PBS-T
6. add 50 µl of diluted Dog Serum
- PBS로 400배 희석한 Dog serum으로 희석률이 높아서 그런지 육안으로 보기에는 투명한 물처럼 보인다. 한쪽 well에만 넣는다.
7. incubate for 1 hr at R.T
- 시간 관계상 이 과정을 30분으로 줄였다. 항원과 항체가 충분히 결합하도록 기다리는 과정이다.
8. wash 3 times with PBS-T
- 부유하고 있는 불필요한 단백질을 제거하는 단계이기 때문에 다른 washing과정보다 더 신경써서 하였다.
9. add 50µl of Antibody-Enzyme Conjugate
- Antibody-Enzyme Conjugate는 detection antibody라고도 불린다. Goat α-Dog IgM와 HRP가 conjugate된 물질을 사용하였다. Dog serum의 IgM과 반응하는 것은 처음에 넣은 capture antibody와 같으나, 결합하는 epitope는 서로 다르다.

참고 자료

없음