plasmid DNA의 제한효소 처리 및 전기영동을 이용한 분리

소개글

plasmid DNA의 제한효소 처리 및 전기영동을 이용한 분리

목차

1. 실험목적
2. 실험이론 및 원리
(1) 제한 효소의 정의
(2) 제한 효소의 특징
(3) 제한 효소의 분류
(4) 대표적인 DNA절단 제한효소와 절단 인식자리
(5) 전기영동(electrophoresis)
3. 실험방법
(1) 제한효소 처리
(2) 전기영동
4. 참고문헌

본문내용

1. 실험목적

분리한 plasmid DNA를 제한효소로 처리하고, 전기 영동법을 이용하여 DNA를 분리하고 확인하는 기술을 습득한다.

2. 실험이론 및 원리


(1) 제한 효소의 정의
제한 효소는 DNA 분자의 특정 염기 배열을 인식하여 자르는 일종의 DNA용 가위이다. DNA도 특정 부위를 절단할 수가 있는데 DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이 연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미한다. 이런 역할을 하는 효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각 exonulease, endonuclease라고 부른다.
대부분의 제한효소는 4쌍 또는 6쌍의 염기배열을 인식하여 자르는데, 제한효소에 의해 잘라지게 되면 양 끝이 상보적인 가닥이 되거나 밋밋한 부분으로 된다. 만일 같은 제한효소로 잘린 DNA가닥을 만나면 상보적인 끝부분 때문에 재결합하기가 쉬운데, 이들을 연결해주는 역할을 하는 것이 ligase이다.
Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소이며, DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고 인식한 서열부위 또는 그 근처에 존재하는 특정부위를 절단한다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포 내로 침입해 들어오는 바이러스와 같은 외부 DNA를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있는 것이며, 자신의 DNA는 절단부위의 염기를 Methylation 시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA를 자를 수 없게 보호하고 있다. 제한효소는 여러 종류가 있는데, 보통 DNA 상에서 4개 이상의 대칭성 염기를 인식하면서 절단한다.

(2) 제한 효소의 특징
- 분자 절단 가위
- 진핵세포 DNA의 클로닝 probe제작, DNA와 RNA 구조 분석에 이용
- 많은 종류의 박테리아 균주에서 천연적으로 발견
- 많은 효소들이 DNA 재조합 연구에 사용

참고 자료

① J.D. Watson외, 유전자의분자생물학, 탐구당, 1991, p.269~279, 343~346, 386
② 김영설 외, 유전자진단의이론과실제, 도서출판 한의학, 1999, p.61~68
③ Robert F. Weaver, 박상대 역, 분자생물학, Life science, 2000, p.52~55
④ Lewis외 저, 전상학 외 역, 생명과학길라잡이, 라이프사이언스, 2005, p.190~191