plasmid분리(예비).

소개글

기본적인 bacteria culture 방법 및 단백질 정제 방법을 익힌다.

목차

◆ 실험 목적
◆ 실험 재료
◆ 실험 원리
◇ Plasmid DNA의 특징
◇ Plasmid DNA의 여러 가지 변성방법
◇ Alkaline lysis method (이번 실험에서 사용)
◇ Neutralization and plasmid DNA adsorption
to the DNA-spinTM column membrane
◇ Washing and Elution
◆ Reference

본문내용

◆ 실험 목적
기본적인 bacteria culture 방법 및 단백질 정제 방법을 익힌다.

◆ 실험 재료
․ LB broth
실험실에서 가장 흔히 사용되는 배지이다.
균 배양 실험에 가장 흔히 쓰이는 LB배지는 Luria - Bertani media 에서 머리글자만 따온 것이다. 배지를 구성하는 물질 조성비율은 tryptone 10g/liter, NaCl 10g/liter, yeast extract 5g/liter 인데, 간단히 LB배지에는 트립톤과 이스트, 염화나트륨이 함유되어 있다고 보면 된다.
LB배지는 이 세 가지 물질을 증류수에 넣어 녹여 만드는 것인데, 요즈음에는 이 시료들을 따로 양을 재서 섞고 만들지 않아도 된다. 이미 약품회사에서 완제품을 판매하고 있기 때문에 그 것을 증류수와 섞어주기만 하면 된다. LB가루를 물(오로지 증류수만 쓴다)에 섞을때는 물 1L에 가루 25g이라는 철칙이 따른다. ( 1L = 1000ml ) 성분 950 ml를 증류수에 녹인 후 pH를 7로 맞추기 위해 5 N NaOH를 첨가(약 200 μl)하고 증류수로 1 liter로 채운다음 autoclave한다.

평상시에는 promoter 직후에 있는 operator에
repressor가 binding 해 있어서 RNA polymerase가 binding을 못하는
상태입니다. 하지만, inducer가 cell 내로 들어오면 repressor와 결합하면서
repressor를 operator로부터 떼어 냅니다. 그러면 RNA polymerase가
binding site에 binding하면서 transcription 이 시작되고, mRNA가
만들어지면서 translation이 되어 protein이 만들어 지는 것이지요. 그러나,
basal level induction 또는 expression이 일어나는데, 이는 repressor의
operator에 대한 결합은 가역적인 것이기
때문에 확률적으로 떨어져 있는 경우가 있기 때문입니다.

참고 자료

- 생명공학실험1, 아주대학교, pp.27-30.
- 유전자 클로닝 입문, 강종백 외 4, 월드 사이언스 , 2004, pp.92-95.
- E. coli Plasmid Vectors : Method and Application, Humana Press, 2003.
- Bacillus subtilis로부터 ampicillin 저항성을 지니는 plasmid의 분리 및 특성 분석
( Isolation and Characterization of Ampicillin - Resistant Plasmid in Bacillus Subtilis),
이희명 이형범, 한국유전학회, 1986.