[생화학] 플라스미드 DNA 분리

목차

플라스미드 DNA 분리 및 제한효소 절단
1. 실험 목적
2. 실험 원리
3. 시약 및 기구
4. 실험 방법
5. 결과 처리
7. 비고

본문내용

1) 플라스미드 DNA 분리
형질 전환 균주가 갖고 있는 플라스미드에 존재하는 내성 유전자에 상응하는
항생물질이 들어간 선택배지에서 이 균주를 배양하면, 플라스미드를 갖고 있는
형질 전환 균주는 항생물질이 존재하는 배지에서 살아남는다. 이 균주를 액체
배지 상에서 적당한 세포수로 배양한 후 회수해서 플라스미드를 얻을 수 있다.
세포를 끓이거나(중탕 방법) 세포를 알칼리 상태에 두면(알칼리 세포파괴 방법)
세포가 용해되면서 세포내에 존재하는 플라스미드가 세포 밖 수용액 상에 나오
게 된다. (DH5 α나 Sure와 같은 전이가 일어나 대장균은 endonuclease Ⅰ을
발현하는 endA 유전자에 전이가 일어나 endonuclease Ⅰ이 불활성이므로 중탕
방법을 사용할 수 있으나 wild-type endonuclease Ⅰ을 갖고 있는 균주에서는
endonuclease Ⅰ이 열에 강하므로 중탕 방법을 사용할 수 없다.) 각각 처리한
후 원심분리를 통해 세포 잔여물을 제거하면 플라스미드가 다량으로 녹아 있는
수용액을 얻을 수 있다. 이 수용액에 에틸 알코올이나 이소프로필 알코올을 처
리하면 DNA가 침전되며 침전된 DNA를 적당한 완충용액에 녹임으로써 플라스미
드 DNA를 정제할 수 있다.

참고 자료

없음