Development of Rapid Immune-Gold Strip Kit for On-Site Diagnosis of Tomato Bushy Stunt Virus

서지정보

ㆍ발행기관 : 한국국제농업개발학회 ㆍ수록지정보 : 한국국제농업개발학회지 / 26권 / 2호
ㆍ저자명 : Ju-Yeon Yoon, Gug-Seoun Choi, In-Sook Cho, Seung-Kook Choi

한국어 초록

‘급속면역금나노입자막대 (RIGS) 키트’라 명명된 RIGS 키트는 간단한 면역 흡착막대 방식으로 사용자가 빠르고 편리하게 이용할 수 있으며 토마토덤불위축바이러스 (TBSV)에 대한 현장진단을 하기 위하여 개발되었다. 토끼의 TBSV 항 혈청에서 정제된 면역글로블린G (IgG)는 단백질A 크로마토그래피법으로 정제되었으며 이후 금 나노입자와 결합하여 니트로셀룰로스막에서 진단 선을 표시하도록 고안되었다. TBSV 항체와 비특이적으로 결합하는 단백질A를 같은 진단막대에서 대조선으로 이용되었다. RIGS-TBSV 키트를 이용한 진단은 의심 식물 시료를 완충액이 들어간 플라스틱 봉지에 넣고 착즙후 진단막대기를 넣으면 5-10분 후 결과를 알 수 있도록 고안되었다. TBSV가 감염된 토마토 즙액에 RIGS 막대기를 넣고 진단한 결과 TBSV 농도에 비례하여 진단 선이 형성됨이 관찰되었으며, 이들 키트들은 TBSV와 연관되지 않은 다른 고추 바이러스들에서는 비특이적 반응이 형성되지 않았다. 이런 결과들은 RIGS-TBSV 키트가 TBSV 진단에 다른 어려운 실험이나 기술이 필요하지 않고 쉽게 병원균을 진단 할 수 있다는 것을 의미한다. 그러므로, RIGS-44 TBSV 키트는 TBSV 감염이 의심되는 식물체들의 현장 진단 뿐만 아니라 실험실에서 의 TBSV 진단에 효과적이라 할 수 있다.

영어 초록

A rapid, user-friendly and simple immune-chromatographic dipstick kit named ‘rapid immuno-gold strip’ (RIGS) kit was developed in a novel single strip format to detect on-site detection of Tomato bushy stunt virus (TBSV). Immunoglobulin G (IgG) from polyclonal antisera raised in rabbits against TBSV was purified through protein-A affinity chromatography and then the purified TBSV-IgG was conjugated to colloidal gold nano-particles which served as a test line on nitrocellulose membrane. Protein A that non-specifically binds to TBSV antibody was used as a control line on the same strip. The diagnosis process with the RIGS-TBSV involves simply grinding the suspect plant sample in a bag that contains the extraction buffer and inserting the strip the bag. Results can be seen in 5-10 minutes. The flow of the complexes of gold particles coated with TBSV-IgG and a crude sap from TBSV infected tomato plants resulted in intensive color formed on the test lines proportional to the concentrations of TBSV. The RIGS-TBSV kit did not show any cross-reactions against Tomato spotted wilt virus and Tomato yellow leaf curl virus that are major causal viruses. These results indicate that the RIGS-TBSV kit is highly sensitive and is not required for laboratory training and experience prior to testing. The RIGS-TBSV kit is suitable for on-site determination of suspect TBSV-infected plants as well as for laboratory diagnosis.

참고 자료

없음